1、我國(guó)是世界第一產(chǎn)珠大國(guó)，目前珍珠總產(chǎn)量高達(dá)1800多噸，占世界珍珠總產(chǎn)量的90％以上。在這1800多噸的總產(chǎn)量中，淡水珍珠占98％以上，其中90％以上是由三角帆蚌育出的。目前我國(guó)養(yǎng)殖的三角帆蚌主要是野生種的直接利用，沒(méi)有經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的人工選育，致使某些經(jīng)濟(jì)性狀出現(xiàn)退化。為了提高珍珠質(zhì)量，改變我國(guó)淡水珍珠養(yǎng)殖業(yè)無(wú)優(yōu)良品種的現(xiàn)狀，對(duì)三角帆蚌種質(zhì)資源、遺傳多樣性及遺傳改良的研究迫在眉睫。池蝶蚌是日本特有的淡水育珠蚌，一些經(jīng)濟(jì)性狀與三角帆蚌互補(bǔ)，是

2、雜交育種的好材料。 本論文詳細(xì)綜述了同工酶、線粒體DNA標(biāo)記、核糖體DNA標(biāo)記和微衛(wèi)星、RAPD、ISSR及AFLP等分子標(biāo)記及其在淡水貝類種質(zhì)鑒定與系統(tǒng)進(jìn)化、遺傳多樣性研究及種質(zhì)資源利用和保護(hù)等研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀。介紹了三角帆蚌和池蝶蚌的養(yǎng)殖與遺傳育種研究現(xiàn)狀。 將已發(fā)表的32對(duì)太平洋牡蠣的微衛(wèi)星引物在三角帆蚌基因組DNA中進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，其中10對(duì)引物(占總數(shù)的31％)在洞庭湖三角帆蚌小群體中即

3、檢測(cè)到了個(gè)體間等位基因的多態(tài)性，共出現(xiàn)40條多態(tài)性條帶，證明太平洋牡蠣的部分微衛(wèi)星引物可用于三角帆蚌基因組分析。同時(shí)構(gòu)建了三角帆蚌微衛(wèi)星富集文庫(kù)，從中篩選到10對(duì)多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記，各位點(diǎn)檢測(cè)到的等位基因數(shù)2-16不等，平均每個(gè)位點(diǎn)檢測(cè)到7.8個(gè)等位基因，除位點(diǎn)Hcul7外偏離，其他9個(gè)位點(diǎn)均符合Hardy-Weinberg平衡，無(wú)連鎖關(guān)系，屬于獨(dú)立遺傳的位點(diǎn)，可用于三角帆蚌遺傳結(jié)構(gòu)和多樣性研究。利用其中的8對(duì)引物，研究江西都昌1個(gè)野生群

4、體、江西都昌和浙江諸暨2個(gè)養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)。共檢測(cè)到90個(gè)等位基因，鄱陽(yáng)湖野生群體每個(gè)位點(diǎn)9.88個(gè)等位基因，而都昌養(yǎng)殖群體、諸暨養(yǎng)殖群體2個(gè)養(yǎng)殖群體每個(gè)位點(diǎn)的等位基因數(shù)分別為8.38和9.38。3個(gè)群體的雜合度、有效群體大小及基因分化指數(shù)均表明養(yǎng)殖群體含有較高的遺傳多樣性，在繁育過(guò)程中可能引入了野生群體的基因。 利用微衛(wèi)星、ISSR和線粒體基因片斷等多種分子標(biāo)記，開(kāi)展了對(duì)我國(guó)五大淡水湖--鄱陽(yáng)湖、洞庭湖、太湖、巢

5、湖、洪澤湖三角帆蚌種質(zhì)資源和遺傳多樣性的研究。將9對(duì)微衛(wèi)星引物和8條ISSR引物，研究我國(guó)五湖三角帆蚌野生群體，結(jié)果表明微衛(wèi)星和ISSR的研究結(jié)果基本一致，鄱陽(yáng)湖群體、太湖群體和洞庭湖群體遺傳多樣性較高，可作為選育基礎(chǔ)群。鄱陽(yáng)湖群體與太湖群體聚在一起，親緣關(guān)系較近，洞庭湖群體與鄱陽(yáng)湖群體、太湖群體親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，為另一分支。對(duì)五大湖三角帆蚌群體的線粒體16S rRNA基因片斷進(jìn)行了序列測(cè)定和分析，得到了473bp的同源核苷酸序列，檢測(cè)到變

6、異位點(diǎn)25個(gè)，7個(gè)單倍型，其中3個(gè)為鄱陽(yáng)湖群體所特有。同時(shí)，鄱陽(yáng)湖群體的其他遺傳多樣性指數(shù)，如多態(tài)性位點(diǎn)、核苷酸多態(tài)性、單倍型多態(tài)性均最高，而洪澤湖多態(tài)性位點(diǎn)、核苷酸多態(tài)性、單倍型多態(tài)性最低，反映了鄱陽(yáng)湖群體具有較好育種潛力，這和微衛(wèi)星的研究結(jié)果一致。AMOVA分析表明，洞庭湖群體與太湖和鄱陽(yáng)湖群體三角帆蚌分化顯著，巢湖和其他4個(gè)群體遺傳分化顯著(P<0.05)，洪澤湖群體與除巢湖群體外的其他群體分化均不顯著。聚類分析結(jié)果也支持微衛(wèi)星和

7、ISSR的研究結(jié)果。運(yùn)用微衛(wèi)星和ISSR兩種分子標(biāo)記，研究了我國(guó)五大湖三角帆蚌中遺傳多樣性高、生長(zhǎng)性能好的鄱陽(yáng)湖、洞庭湖和太湖3個(gè)群體及其6個(gè)正反交后代的遺傳變異，結(jié)果表明雜交后代的遺傳變異均大于各群體自交后代，其中PD組合(鄱陽(yáng)湖群體♀×庭湖群體♂)和TD組合(太湖群體♀×洞庭湖群體♂)的遺傳變異最大，DP組合(洞庭群體♀×鄱陽(yáng)湖群體♂)、TP組合(太湖群體♀×鄱陽(yáng)湖群體♂)變異較小。并從分子角度對(duì)雜交后代雜交優(yōu)勢(shì)進(jìn)行了預(yù)測(cè)，與實(shí)際雜

8、交優(yōu)勢(shì)測(cè)定結(jié)果相符。 在前期發(fā)現(xiàn)三角帆蚌和池蝶蚌的反交組合具有雜交優(yōu)勢(shì)的基礎(chǔ)上，對(duì)它們開(kāi)展了雜交優(yōu)勢(shì)的分子基礎(chǔ)研究，利用微衛(wèi)星和ISSR對(duì)三角帆蚌和池蝶蚌正反交后代與親本的遺傳差異進(jìn)行分析。結(jié)果表明，反交群體CS的微衛(wèi)星雜合度、多態(tài)性信息指數(shù)及TSSR的平均多態(tài)性均高于正交群體及2個(gè)親本群體，雜交引起子代遺傳多樣性增加，可能是雜交種存在雜交優(yōu)勢(shì)的遺傳基礎(chǔ)。微衛(wèi)星研究顯示雜交子代與2親本的遺傳距離不是對(duì)等的，更偏向與親本三角帆蚌。

9、反交群體CS與其母本CC的遺傳相似指數(shù)為0.8856，遺傳距離為0.1214，而與其父本SS的遺傳相似指數(shù)為0.8938，遺傳距離為0.1123，正交群體SC與其母本SS的遺傳相似指數(shù)為0.7932，遺傳距離為0.2317，而與其父本CC的遺傳相似指數(shù)為0.7432，遺傳距離為0.2968。對(duì)三角帆蚌和池蝶蚌正反交后代與親本線粒體基因片斷(mt COI、mt 16s rRNA)和核糖體間隔序列ITS-1進(jìn)行了序列測(cè)定和分析，分別獲得了長(zhǎng)

10、度為610bp(mt COI)、451bp(mt 16S rRNA)和472bp(ITS-1)的同源序列，單倍型數(shù)分別為16、11和14。三角帆蚌和池蝶蚌的遺傳距離與五大湖三角帆蚌群體間遺傳距離水平相當(dāng)，遺傳分化屬中等水平，基因流Nm大于1，說(shuō)明二者之間有充分的基因交流。從系統(tǒng)樹(shù)看，三角帆蚌、池蝶蚌和其正反交雜交后代SC、CS各自沒(méi)有聚為單系群，相互間不能明確區(qū)分，且二者之間可以雜交產(chǎn)生正常的后代。從分子水平上證明了三角帆蚌和池蝶蚌為同