道地產(chǎn)區(qū)丹參內(nèi)生真菌組成及其功能的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、丹參(Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma)為唇形科植物丹參 Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。主要含丹參酮類和丹酚酸兩類成分。河南、山東、四川是丹參的道地產(chǎn)區(qū)。道地藥材質量除受遺傳因素的主導外,適宜的生長環(huán)境也是形成其優(yōu)良品質的必要條件。內(nèi)生菌作為構成植物內(nèi)環(huán)境的重要組成部分,與宿主植物長期協(xié)同進化,形成了互利共生的關系,與優(yōu)質藥材的形成有關。
  本研究采用

2、純培和非純培結合法對道地產(chǎn)區(qū)丹參內(nèi)生真菌的群落結構進行了研究,并通過內(nèi)生真菌與丹參懸浮細胞共培養(yǎng)的方法,初步驗證了內(nèi)生真菌對丹參酮類代謝產(chǎn)物合成的影響。
  首先,純培法從河南方城、山東臨沂、四川中江3個產(chǎn)地15株丹參的根中分離得到48株內(nèi)生真菌。經(jīng)ITS區(qū)rDNA序列分析,鑒定為4綱7目8科8屬9種,分屬于子囊菌亞門和半知菌亞門,其中以其中Alternaria alternata(互隔交鏈孢霉)為優(yōu)勢菌種,占總菌株數(shù)的27.08

3、%。
  其次,采用DGGE結合測序的方法對3個道地產(chǎn)區(qū)丹參內(nèi)生真菌的群落結構進行了研究?;谡婢鶬TS區(qū)rDNA,采用nested-PCR方法,對3個道地產(chǎn)區(qū)丹參內(nèi)生真菌群落結構進行了DGGE分析,并將DGGE圖譜中可見條帶切膠回收后克隆測序。所得序列進行 BLAST比對后,獲得18種菌,其中,純培法中未得到的有12種內(nèi)生真菌在DGGE中可見,4綱7目7科7屬8種(其中有4種無法確定其種類),以Alternaria altern

4、ata(互隔交鏈孢霉)為優(yōu)勢種。遺傳多樣性分析表明,丹參內(nèi)生真菌的多樣性與其所處的環(huán)境關系密切,環(huán)境條件相似的產(chǎn)區(qū)內(nèi)生真菌遺傳多樣性越相近。純培法與非純培法結合共獲得內(nèi)生真菌21種。
  最后,通過內(nèi)生真菌與丹參懸浮細胞共培養(yǎng)結合HPLC法測定培養(yǎng)物種丹參酮類化合物的含量,結果表明內(nèi)生真菌對丹參酮類化合物的積累與合成產(chǎn)生影響。不同的內(nèi)生真菌對丹參酮類化合物的影響不同,同一種內(nèi)生真菌對丹參酮類化合物也可產(chǎn)生不同的影響。篩選出了促進丹

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