1、植物內(nèi)生真菌是在植物體內(nèi)渡過全部或部分生活周期，而不使宿主植物表現(xiàn)出明顯的病害癥狀的真菌?，F(xiàn)已有報道表明，由藥用植物中分離得到的內(nèi)生真菌，能夠產(chǎn)生與其宿主植物相同或相似的化學(xué)成分。本研究對幾種具有抑菌作用藥用植物的內(nèi)生真菌進行分離，并對其代謝產(chǎn)物的抑菌活性進行篩選。對其中具有較強抑菌活性的人參內(nèi)生真菌RP進行了更進一步的研究。對菌株RP生物學(xué)特性、各種培養(yǎng)條件對抑菌物質(zhì)的影響進行了研究，并通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對該菌株進行了屬種鑒定

2、。同時對該菌株抑菌活性成分進行初步的分離和鑒定研究。實驗結(jié)果如下： 1.采用組織塊分離法，以PDA、CMA、MEA、HMA和TWA培養(yǎng)基為內(nèi)生真菌分離培養(yǎng)基，在20℃下避光培養(yǎng)，對內(nèi)生菌進行分離。實驗發(fā)現(xiàn)以組織塊印跡法對組織塊表面消毒效果進行檢測結(jié)果更加可靠，更靈敏。由12種藥用植物的莖和葉及花序中分離得到48株內(nèi)生真菌。其中莖內(nèi)分離得到20株，葉內(nèi)分離得到19株，花中分離得到9株。PDA-鏈霉素培養(yǎng)基為較適宜的分離培養(yǎng)基。

3、 2.對48株分離得到的內(nèi)生真菌的菌塊、發(fā)酵液和菌絲醇提液的抑菌活性分別進行了篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)人參、黃芩、黃芪和柴胡4種藥用植物中分離得到的內(nèi)生真菌的菌塊、發(fā)酵液和菌絲醇提液3部分均具有抑菌活性，其中又以人參內(nèi)生真菌RP的抑菌活性最強，并且對幾種測試菌均有一定的抑菌活性，對金黃色葡萄球菌的相對抑制率最高達到76％。選擇活性菌株人參內(nèi)生真菌RP進行更深入的研究。 3.抑菌活性菌株人參內(nèi)生真菌RP在培養(yǎng)時的較適宜C源為大米，N源為

4、酵母；最適宜的培養(yǎng)溫度為24℃，培養(yǎng)到25天時，活性物質(zhì)產(chǎn)生達到最高值。該菌對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度(MIC)為8gg/mL。通過形態(tài)學(xué)鑒定該菌株為Phomopsis.sp，5.8SrDNA的PCR測序結(jié)果顯示，序列長為539bp，該菌株與Preussia flnaganii序列同源性為99％。但他們在形態(tài)上卻有很大不同，這需要通過結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的對比進一步的研究。 4.對菌株RP的活性成分進行了初步的研究。采用大

5、孔樹脂柱的方法找到抑菌活性物質(zhì)的存在部位。發(fā)現(xiàn)大部分的活性物質(zhì)溶于80％-90％的乙醇溶液中。而在80％-90％乙醇溶液收集到的洗脫液中，檢測到了有皂甙類成分存在，并對其中的皂甙類成分通過薄層層析法(TLC)進行了初步鑒定，結(jié)果在Rf值分別為Rf<,1>=0.3974，Rf<,2>=0.5128，Rf<,3>=0.8846時分離得到了3個點。其中，Rf值為0.3974的點與人參皂甙Re的Rf值相同，說明在菌株RP的發(fā)酵液中可能含有人參皂