1、植物內(nèi)生菌可產(chǎn)生豐富的生物活性物質(zhì)，是開發(fā)新型生物農(nóng)藥的天然資源寶庫(kù)。本文從3種禾本科植物野生日本看麥娘（Alopecurus japonicas Steud.）、草地早熟禾（Poapratensis L.）、狗牙根(Cynodon dactylon(Linn.) Pers.)等的根、莖、葉中分離內(nèi)生菌，并測(cè)定其對(duì)小麥赤霉病菌的抑菌活性，旨在篩選出對(duì)小麥赤霉病菌有抑菌活性的內(nèi)生菌，為進(jìn)一步開發(fā)防治小麥赤霉病的生物藥劑奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)

2、果如下:
　　(1)采用勻漿法和組織塊培養(yǎng)法從3種野生禾本科雜草中共分離得到68株內(nèi)生菌，其中內(nèi)生真菌31株，內(nèi)生細(xì)菌28株，內(nèi)生放線菌9株。通過(guò)對(duì)小麥赤霉病菌的抑菌活性實(shí)驗(yàn)，篩選得到6株活性內(nèi)生菌，分別為看麥娘內(nèi)生真菌KMN-1和KMN-11，看麥娘內(nèi)生細(xì)菌KMN-7、KMN-12、早熟禾內(nèi)生細(xì)菌CPC-5，早熟禾內(nèi)生放線菌CPC-3，其中看麥娘內(nèi)生真菌KMN-1菌株和KMN-11菌株活性最強(qiáng)，對(duì)小麥赤霉病菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率分別

3、為71.00％和85.14％。
　　(2)通過(guò)離體和活體試驗(yàn)，系統(tǒng)研究了內(nèi)生真菌菌株KMN-1和KMN-11的殺菌活性。離體穗部試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表明，2株看麥娘內(nèi)生真菌對(duì)小麥赤霉病菌的菌絲生長(zhǎng)具明顯的拮抗作用，KMN-1和KMN-11菌株的發(fā)酵液抑制小麥赤霉病菌菌絲生長(zhǎng)的EC50值分別為6572.97 mg·L-1、5218.34 mg·L-1（按發(fā)酵液中干物質(zhì)量計(jì)算）。進(jìn)一步通過(guò)離體麥穗和田間小區(qū)實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)研究了KMN-1和KMN-

4、11發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)小麥赤霉病的防治效果，結(jié)果表明KMN-1和KMN-11對(duì)小麥赤霉病均表現(xiàn)較好的防治作用，在離體麥穗上，KMN-1發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)小麥赤霉病的保護(hù)和治療作用防治效果分別為78.13％、76.52％，KMN-11發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)小麥赤霉病的保護(hù)和治療作用防治效果分別為54.69％、57.58％。在小區(qū)生防試驗(yàn)中，2株內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物也可降低小麥赤霉病的發(fā)病程度，噴施菌株KMN-1發(fā)酵液，對(duì)小麥赤霉病的保護(hù)和治療作用防治效果為52.76％、

5、40.72％，菌株KMN-11的發(fā)酵液對(duì)小麥赤霉病的保護(hù)和治療作用防治效果為45.71％、32.26％。
　　(3)通過(guò)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)等方法，對(duì)菌株KMN-1和KMN-11進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明，菌株KMN-1與細(xì)極鏈格孢（Alternaria tenuissima）、鏈格孢(Alternariaalternaria)的相似度均高達(dá)100％，再結(jié)合菌落、顯微形態(tài)特征，將菌株KMN-1(NCBI登錄號(hào):KP211537)鑒定為細(xì)極

6、鏈格孢（Alternaria tenuissima）。菌株KMN-11與變紅鐮孢（Fusarium incarnatum）、木賊鐮孢（Fusarium equiseti）的相似度高達(dá)99％，進(jìn)一步進(jìn)行EF-1α序列測(cè)定，結(jié)果顯示KMN-11與木賊鐮孢（Fusarium equiseti）親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)，且培養(yǎng)性狀與形態(tài)學(xué)特征有較大差異，故將菌株KMN-11(NCBI登錄號(hào):KP211538)初步鑒定為變紅鐮孢（Fusarium inc

7、arnatum）。
　　(4)采用綠色熒光蛋白標(biāo)記法，進(jìn)行小麥植株中內(nèi)生真菌KMN-1和KMN-11菌株定殖情況的研究。綠色熒光標(biāo)記結(jié)果表明，標(biāo)記菌KMN-1的熒光明亮程度不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化子傳代穩(wěn)定性差，標(biāo)記菌KMN-11的熒光明亮，轉(zhuǎn)化子傳代穩(wěn)定性好。進(jìn)一步測(cè)定了在不同條件下農(nóng)桿菌介導(dǎo)菌株KMN-11轉(zhuǎn)化時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)化效果的影響，結(jié)果表明，菌株KMN-11與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)的最佳時(shí)間為20h;農(nóng)桿菌介導(dǎo)KMN-11轉(zhuǎn)化時(shí)均需要乙酰丁香酮(AS

8、)的存在，最佳使用濃度為200μg·mL-1;菌株KMN-11的轉(zhuǎn)化子在PH為7的平板上長(zhǎng)勢(shì)最好，菌落直徑最大，過(guò)酸過(guò)堿都不利于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化菌株的生長(zhǎng)。攜帶了綠色熒光蛋白基因的KMN-11菌株在小麥植株內(nèi)定殖研究結(jié)果表明，浸種、灌根、噴霧以及注射4種方法處理后，菌株KMN-11在小麥植株內(nèi)短期定殖，但定殖能力弱，在21d后植株中幾乎檢測(cè)不到目標(biāo)菌體。
　　(5)采用液-液萃取、薄層層析等方法，對(duì)看麥娘內(nèi)生真菌KMN-11的抑菌活性成