1、單位代碼：!Q!鳋三比鉑砷范大爹碩士學位論文堿蓬內(nèi)生細菌的分離鑒定及抑菌活性研究論文作者：刻遮揚學科專業(yè)：生塹焦堂魚僉王生塹堂指導教師：趕鹽培養(yǎng)單位：絲堂皇生僉整堂堂瞳培養(yǎng)類另4：全旦劍完成時間：2Q!!生Q三月22旦一沈陽師范大學學位評定委員會堿蓬內(nèi)生細菌的分離鑒定及抑菌活性研究手兩姜植物內(nèi)生細菌(endophyticbacteria)是指能在健康植物組織內(nèi)棲居而對植物不造成實質(zhì)性危害并與植物建立了和諧聯(lián)合關系的微生物。近年來的研究證

2、明，植物內(nèi)生菌具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化等生物學活性，作為特殊的微生物資源一植物內(nèi)生菌及其代謝產(chǎn)物己成為研究和發(fā)現(xiàn)新的天然藥物和生物活性成分的重要資源庫，是微生物研究領域的熱點方向之一。堿蓬(Suaedaglaucabge)生長于鹽漬化土壤、湖濱、河岸和沿海地帶，是典型的鹽堿地指示植物，也是植物耐鹽基因研究的重要模式材料。生活環(huán)境的特殊性使其內(nèi)生茵的生理和代謝可能呈現(xiàn)出與一般微生物不同的特征。本試驗選擇鹽生植物堿蓬作為抗菌內(nèi)生菌的

3、分離材料，從中分離篩選出l株具有廣譜抗菌活性的EB0901菌株，對其進行生物學特性觀察和初步鑒定，同時進行了生長條件優(yōu)化及抑菌活性的初步研究。結果如下：1堿蓬內(nèi)生菌的分離篩選采用組織表面消毒法分別從堿蓬根莖葉的300多個組織塊中分離出104株植物內(nèi)生菌。其中細菌5株、真菌99株。通過平板對峙法從5株細菌中篩選出對真菌有強烈拮抗作用的內(nèi)生細菌，編號為EB0901菌株。2EB0901菌株的形態(tài)學觀察及鑒定通過對EB0901菌株進行形態(tài)學觀察

4、，其生物學特征是：該菌株在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上菌體為桿狀，產(chǎn)生芽孢，周生鞭毛，是革蘭氏陽性茵；生理生化特征測定顯示：接觸酶、淀粉水解、甲基紅試驗均呈陽性；VP反應、硫化氫試驗結果均呈陰性，是兼性厭氧型。參照《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》和《伯杰細菌鑒定手冊》第八版，初步鑒定該菌株應歸于鹽芽孢桿菌屬。3EB0901菌株生長條件的優(yōu)化初步研究了EB0901菌株的發(fā)酵條件，明確了較佳培養(yǎng)基組成及培養(yǎng)條件。以每升培養(yǎng)基中含有酵母膏5g，淀粉30g，牛

5、肉膏6g，硫酸銨02g，蛋白胨10g為宜，在起始pH70，接種量5％，NaCI濃度05％，培養(yǎng)溫度35℃，搖床轉速180rmin。的條件下生長最佳。4EB0901菌株的抑菌活性EB0901菌株及其產(chǎn)物具有廣譜抗菌活性。對8種植物病原真菌、6種細菌和5種霉菌均有不同程度的抑菌作用，其中對玉米大斑病菌、辣椒菌核病菌、平臍孺孢病菌、辣椒炭疽病菌等植物病原真菌的抑菌率達60％以上；對金黃色葡萄球菌和四聯(lián)球菌的抑菌效果明顯，抑菌率分別達6703％