過表達microRNA-30c對子宮內膜癌細胞株作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討體外過表達microRNA-30c(miR-30c)對子宮內膜癌Ishikawa及HEC-1-B細胞株生物學行為的影響及其作用機制。
　　 方法：設計并構建能在腫瘤細胞中表達成熟miR-30c的表達質粒載體pRNAT-CMV3.2-Neo-miR-30c，以及陰性對照質粒pRNAT-CMV3.2-Neo-miR-N，轉染子宮內膜癌Ishikawa及HEC-1-B細胞株，real-time PCR檢測細胞內成熟miR-3

2、0c表達情況。MTT比色法檢測細胞的增殖，流式細胞儀檢測細胞凋亡，人工重組基底膜侵襲小室(Transwell)觀察細胞的侵襲能力。Real-time PCR檢測腫瘤轉移相關基因-1(MTA1)mRNA表達量，Western Blot檢測MTA13蛋白表達量。設計并構建含有miR-30c與MTA1的3'非編碼區(qū)(3'UTR)可能作用位點序列的PGL3-MTA1-3'UTR及相應陰性對照熒光素酶報告基因載體，并與miR-30c表達質粒載體共

3、轉染細胞，檢測其熒光素酶活性。
　　 結果：成功構建pRNAT-CMV3.2-Neo-miR-30c表達質粒載體并轉染Ishikawa及HEC-1-B細胞，Real-time PCR證實轉染質粒表達成熟miR-30c有效。轉染pRNAT-CMV3.2-Neo-miR-30c表達質粒載體的細胞增殖能力減低，侵襲能力減弱，但凋亡率沒有明顯改變。過表達miR-30c細胞MTA1的mRNA及蛋白質表達量均降低。成功構建熒光素酶報告基因載

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