1、尿路上皮癌(urothelial carcinoma UC)是最常見的泌尿系腫瘤，最新的流行病學報告顯示UC 分別占男性和女性惡性腫瘤發(fā)病的第五位和第十位。UC是一個多因素和多階段的逐漸發(fā)展過程，涉及到抑癌基因的失活、癌基因的活化、細胞周期的調(diào)控失常、基因啟動子的轉錄活化異常等遺傳學或表遺傳學異常等諸多方面。人類基因組有兩類遺傳信息，一類是提供生命必需的蛋白質(zhì)模板信息，稱遺傳學的信息；而另一類稱表遺傳學的信息，是指在何時、何地、以何種方

2、式應用上述蛋白質(zhì)模板信息的指令信息。表遺傳學信息狀態(tài)的確定可為腫瘤的早期診斷及基因治療提供依據(jù)。有研究結果表明，表遺傳學改變多發(fā)生在腫瘤發(fā)生的早期，此時腫瘤細胞還未對人體造成實質(zhì)性損害，如能在此時進行人工干預，即有可能將腫瘤扼殺在搖籃中。啟動子甲基化和組蛋白乙?；潜磉z傳學修飾最重要的二種機制。5-氮雜脫氧胞苷(5-aza-dC)是現(xiàn)今最重要的DNA 甲基化轉移酶(DNMT)抑制劑之一，而曲古抑菌素A（TSA）則是研究最多的組蛋白去乙酰

3、化酶(HDAC)抑制劑，二者的聯(lián)合使用可以促使腫瘤細胞的分化并誘導腫瘤的凋亡。已有研究表明維甲酸（RA）濃度過低參與了膀胱癌的發(fā)生，使用維甲酸在治療膀胱癌中也取得一定進展。而ALDH1a2是催化視黃醛的氧化成維甲酸關鍵酶之一。有研究證明人類醛脫氫酶家族中ALDH1a2基因啟動子區(qū)域高甲基化可導致前列腺癌發(fā)病率升高，但在膀胱癌細胞株中仍無相關研究。我們首先對5 株膀胱癌細胞株及11例正常膀胱上皮組織的ALDH1a2 啟動子甲基化狀態(tài)與mR

4、NA，蛋白表達進行相關性研究后，再采用5-aza-dC、TSA處理膀胱癌細胞株逆轉其甲基化狀態(tài)后，探討對其影響進而誘導膀胱癌細胞凋亡的機制。
　　 目的：探討ALDH1a2基因在膀胱癌細胞株的甲基化狀態(tài)和表達及5-aza-dC、TSA對其影響進而誘導膀胱癌細胞凋亡的機制。
　　 方法：
　　 1. 5-aza-dC 及TSA處理膀胱癌細胞。
　　 2. 采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(MSP)檢測五株膀胱癌

5、細胞株（BIU-87,RT-4,253J,5637,T24）及正常膀胱上皮組織經(jīng)5-aza-dC、TSA處理前后的ALDH1a2啟動子甲基化。
　　 3. 采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)分析正常膀胱上皮組織及五株膀胱癌細胞株經(jīng)5-aza-dC、TSA處理前后ALDH1a2基因mRNA的表達。
　　 4. 采用Western blot檢測經(jīng)5-aza-dC、TSA處理前后五株膀胱癌細胞株及正常膀胱上皮組織ALDH

6、1a2基因蛋白的表達。
　　 5. 采用AnnexinⅤ/PI雙標記法，檢測經(jīng)5-aza-dC、TSA處理前后的五株膀胱癌細胞株的凋亡及壞死。
　　 結果：
　　 1. 在正常膀胱上皮組織中，ALDH1a2基因啟動子區(qū)CpG島表現(xiàn)為低甲基化。在五株膀胱癌細胞中，ALDH1a2基因啟動子區(qū)CpG島均表現(xiàn)為較高的甲基化；TSA不影響ALDH1a2基因DNA 甲基化水平；應用5-Aza-dC能使ALDH1a2基因啟動子

7、區(qū)CpG 島發(fā)生去甲基化；聯(lián)合給予5-Aza-dC及TSA的作用和單獨給予5-Aza-dC相似。五株膀胱癌細胞中，RT-4、253J和5637細胞與BIU-87,T24細胞不盡相同，后者啟動子區(qū)CpG島甲基化程度更高并且更容易去甲基化。
　　 2.ALDH1a2基因在正常膀胱上皮組織有表達。在五株膀胱癌細胞中均無表達；經(jīng)TSA作用后也無表達；5-Aza-dC作用后，RT-4、253J和5637細胞中有較弱表達：吸光度相對值為0.

8、168，0.146，0.153，均來源于低分化高度惡性的BIU-87，T24細胞中有稍強表達：相對值為0.342，0.402；聯(lián)合作用后五株細胞均有較強表達：相對值為0.293，0.324，0.421，0.658，0.753，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3.ALDH1a2基因蛋白在正常膀胱上皮組織有表達。在五株膀胱癌細胞中均無表達；經(jīng)TSA作用后，T24細胞中有少量表達，其他四株細胞無表達；5-Aza-

9、dC作用后，五株細胞均有表達，在T24細胞中表達較強；聯(lián)合作用后五株細胞中均有較強表達。
　　 4.TSA和5-aza-dC 均可誘導膀胱癌細胞株凋亡，五株膀胱癌細胞早期凋亡與晚期凋亡及壞死的變化趨勢稍有不同，前者呈直線上升趨勢，早期凋亡是膀胱癌細胞株死亡的主要方式，晚期凋亡/壞死的細胞相對較弱。三個實驗組的細胞凋亡率分別與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在實驗濃度下，TSA組和5-aza-dC組誘導凋亡的效果以