1、油菜菌核病(Sclerotinia.sclerotiorum)是一種世界范圍的真菌性病害。在中國，油菜菌核病居油菜三大病害之首，嚴(yán)重影響了我國的油菜生產(chǎn)。近年來，隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展以及油菜轉(zhuǎn)化體系的建立，許多學(xué)者通過基因工程的手段研究油菜的抗病性。核盤菌能侵染400多種植物。根據(jù)它致病的關(guān)鍵因子去尋求控制策略是最根本的途徑。由于它產(chǎn)生高度致病因子一草酸，因此引入編碼草酸降解酶的基因來獲得對分泌草酸病原真菌的抗性是一個極具前途的方法。

2、為研究草酸氧化酶基因(Oxalate oxidase gene，OxO)對植物抗病的作用及獲得抗菌核病油菜植株，本研究以煙草(Nicotiana tabacum)和雙低甘藍(lán)型油菜(Double-low.Brassica napus)為試材，將來自于小麥的草酸氧化酶基因進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化，主要工作及結(jié)果如下： 1.適宜農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系的建立 以煙草常規(guī)品種和甘藍(lán)型雙低油菜品種為材料，選用煙草葉片，油菜子葉柄作為轉(zhuǎn)化受體，建

3、立了適宜的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系。 通過對各種影響因素的分析，最終確定煙草轉(zhuǎn)化再生系統(tǒng)中最適培養(yǎng)基為：I.分化培養(yǎng)基：MS+4 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA，pH 5.8．Ⅱ.篩選培養(yǎng)基：分化培養(yǎng)基+100 mg/Km(卡那霉素)+500 mg/LCb(羧芐青霉素)，pH 5.8。Ⅲ.生根培養(yǎng)基：1/2 MS+2 mg/L IBA+100 mg/LKm+300 mg/L C b(羧芐青霉素)，pH 5.8 油菜轉(zhuǎn)

4、化再生系統(tǒng)中最適培養(yǎng)基為：I. 預(yù)培養(yǎng)基：MS+1 mg/L2,4.D+0.2 mg/L 6-BAII.分化培養(yǎng)基：MS+2.5mg/L 6-BA+0.1 mg/LNAA'pH 5.8。Ⅱ.篩選培養(yǎng)基：分化培養(yǎng)基+10.15 mg/LKm+500 mg/LCb+6 mg/LAgNO<,3>，pH 5.8。Ⅲ.生根培養(yǎng)基：1/2：MS+2 mg/LIBA+20 mg/LKm+300 mg/LCb，pH 5.8。 2.卡那霉素抗性苗

5、的獲得 首先用處于對數(shù)分裂中期OD<,600>為0.3～0.4左右時的帶有草酸氧化酶基因的農(nóng)桿菌菌液侵染材料，再通過與農(nóng)桿菌的共培養(yǎng)，最后用卡那霉素篩選，得到煙草卡那霉素抗性苗11株，油菜卡那霉素抗性苗12株。 3．抗性苗的PCR檢測 利用特異引物對抗性苗進(jìn)行PCR檢測，11株煙草卡那霉素抗性苗中的9株，12株油菜卡那霉素抗性苗中的7株表現(xiàn)陽性，擴增出與陽性對照一致的470 bp草酸氧化酶基因片段。 4．