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![利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將PTA和反義Wx雙基因?qū)胨镜难芯?pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/af0eccf0-c658-4917-a523-5d3df1fa49e3/af0eccf0-c658-4917-a523-5d3df1fa49e31.gif)
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1、本實(shí)驗(yàn)結(jié)合根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,將構(gòu)建于同一載體上的水稻反義蠟質(zhì)基因和半夏凝集素基因?qū)胨荆M梅戳x蠟質(zhì)基因的干擾,降低蠟質(zhì)基因的表達(dá)量,從而下調(diào)稻米胚乳中直鏈淀粉含量的同時(shí)也提高水稻的抗蟲(chóng)性。這為同時(shí)改良水稻多個(gè)性狀提供了一種新的途徑。本實(shí)驗(yàn)主要獲得了以下研究結(jié)果: 1.分別以不同材料的幼胚作為遺傳轉(zhuǎn)化受體,獲得了一批轉(zhuǎn)水稻反義蠟質(zhì)基因和半夏凝集素基因的潮霉素抗性植株。 2.對(duì)潮霉素抗性植株的PCR檢測(cè)結(jié)果表明大多數(shù)
2、抗性植株其選擇標(biāo)記基因與外源目的基因共整合,少數(shù)植株只整合了選擇標(biāo)記基因和其中的一個(gè)目的基因,還有的個(gè)別植株只整合進(jìn)了選擇標(biāo)記基因而無(wú)目的基因。 3.對(duì)隨機(jī)抽取的PCR檢測(cè)雙陽(yáng)性植株進(jìn)行Southernblotting雜交檢測(cè)分析表明:水稻反義蠟質(zhì)基因和半夏凝集素基因均已整合到轉(zhuǎn)基因水稻的基因組中,且目的基因基本上都是以低拷貝的方式整入。 4.對(duì)PTA基因進(jìn)行RT-PCR分析,結(jié)果表明PTA基因在轉(zhuǎn)錄水平上得到了表達(dá)。
3、 5.將轉(zhuǎn)基因植株T1代自交種子成熟胚滅菌后接種在加有潮霉素的1/2MS培養(yǎng)基上進(jìn)行潮霉素抗性發(fā)芽實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明:隨機(jī)抽取的10個(gè)轉(zhuǎn)基因株系中有9個(gè)株系T1代植株的自交種子潮霉素抗感分離比符合3:1,遵循孟德?tīng)枂位蝻@性遺傳規(guī)律。 6.為了檢測(cè)反義蠟質(zhì)基因是否確已起到下調(diào)水稻胚乳直鏈淀粉含量的作用,隨機(jī)抽取各陽(yáng)性獨(dú)立轉(zhuǎn)化株(以中花9號(hào)和日本晴為例)按農(nóng)業(yè)部頒布的簡(jiǎn)化法進(jìn)行T1代成熟種子胚乳中直鏈淀粉含量的測(cè)定。結(jié)果表明:不
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