1、在番茄果實的發(fā)育成熟過程中，乙烯起著重要的調(diào)控作用，而Le-EIN3蛋白質(zhì)是番茄乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑上一個重要的轉(zhuǎn)錄因子，番茄 EIL3 基因的表達能夠活化已知的乙烯傳導(dǎo)過程，并啟動一系列由乙烯調(diào)節(jié)的目標(biāo)基因的表達，它對乙烯反應(yīng)起正調(diào)控作用。番茄EIN3的作用和調(diào)控機制并不完全清楚，為了能夠?qū)Ψ压麑嵃l(fā)育成熟機理進行深入的研究，克隆番茄 EIL3 基因并表達、純化該蛋白具有十分重要的意義， 番茄 EIL3 基因在GenBank中的序

2、號為AF328786，其編碼序列全長為1844bp。經(jīng)同源分析，該基因序列與煙草的EIL3基因序列具有 79％的同源性，與擬南芥EIN3、EIL1、EIL2和EIL3的同源性分別為59％、56％、52％、46％。根據(jù)番茄EIL3基因序列設(shè)計引物，PCR擴增EIL3目的基因。經(jīng)酶切、連接、轉(zhuǎn)化等操作構(gòu)建pET15b-EIL3、pET30a-ElL，3和pPIC9k-EIL3這三種表達載體，并通過PCR快速檢測、酶切檢測、測序等方法對陽性克

3、隆子進行了鑒定檢測。將pET15b-EIL3、pET30a-EIL3轉(zhuǎn)化進入BL21大腸桿菌，構(gòu)建成兩種原核表達工程菌，然后采用IPTG誘導(dǎo)的方式誘導(dǎo)外源蛋白質(zhì)的表達，并通過SDS-PAGE、ELISA等方法對誘導(dǎo)表達結(jié)果進行鑒定檢測；將pPIC9k-EIL3轉(zhuǎn)化進入KM71酵母菌，通過G418多拷貝篩選和SDS-PAGE電泳的方法篩選了4株表達效率較高的pPIC9k-EIL3/KM71表達工程菌，采用甲醇誘導(dǎo)的方式誘導(dǎo)表達外源蛋白質(zhì)，