1、目的:建立左股骨中段閉合折骨經(jīng)皮髓內(nèi)克氏針固定的標(biāo)準(zhǔn)骨折模型,觀察復(fù)元活血湯對SD大鼠骨折愈合過程中局部轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1) mRNA、蛋白表達(dá)、血清Ⅰ型膠原、骨鈣素表達(dá)的影響,石蠟切片,X光片,觀察骨折愈合情況,通過RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)),ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)法)進(jìn)行分析轉(zhuǎn)化生長因子β1的表達(dá),探討復(fù)元活血湯對大鼠骨折愈合的影響。

2、r>　　方法:選擇健康3個月齡雄性大鼠70只。建立閉合性的股骨干折骨髓內(nèi)固定模型,將66造模成功的隨機分為復(fù)元活血湯組30只和生理鹽水組30只和正常組6只,復(fù)元活血湯組和生理鹽水組每組又分為骨折后3、5、7、14、21d5個時相點,每個時相點有6只。大鼠麻醉蘇醒后開始每天灌服1g/ml復(fù)元活血湯藥液2ml,每天兩次,生理鹽水組相同條件下灌服等體積的生理鹽水,分別于3、5、7、14、21d取下骨痂組織,通過RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反

3、應(yīng)),ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)法)進(jìn)行分析轉(zhuǎn)化生長因子β1mRNA及蛋白表達(dá)。腹主動脈取血,檢測血清Ⅰ型膠原、骨鈣素的表達(dá);同時取骨折區(qū)組織行石蠟切片,HE染色,顯微鏡下觀察。
　　結(jié)果:復(fù)元活血湯能促進(jìn)骨折SD大鼠Ⅰ型膠原、骨鈣素、TGF-β1mRNA及蛋白的表達(dá)。SD只大鼠全部納入結(jié)果分析。SD大鼠血清Ⅰ型膠原3d時開始表達(dá)增強,7天表達(dá)減弱,達(dá)到低谷(高于正常值)。然后表達(dá)逐漸增強,21天時達(dá)到高蜂,兩組的表達(dá)趨勢一致

4、。而中藥組表達(dá)量始終較對照組高,血清骨鈣素的表達(dá)與Ⅰ型膠原的表達(dá)基本一致。TGF-β1在骨折愈合的不同階段基因表達(dá)的水平是不同的,其表達(dá)在骨折后第3天有一個初期峰值;在第7天會出現(xiàn)一個低谷;而在骨折后第2周,轉(zhuǎn)化生長因子的表達(dá)會再次升高,達(dá)到第2個峰值,也是最高表達(dá)期;其后的表達(dá)逐漸降低。骨折后3、7、14、21d復(fù)元活血湯組轉(zhuǎn)化生長因子β1mRNA的表達(dá)高于生理鹽水組。TGF-β1mRNA與蛋白的表達(dá)具有一致性。中藥組與對照組比較,骨

5、折后7d、14d TGF-β1mRNA增強非常顯著(P＜0.01),14d蛋白表達(dá)增強顯著。復(fù)元活血湯能刺激骨折SD大鼠能促進(jìn)骨折的愈合。
　　結(jié)論:1.大鼠股骨中段閉合折骨髓內(nèi)克氏針固定骨折模型穩(wěn)定,可操作性強,重復(fù)性好。
　　2.復(fù)元活血湯能促進(jìn)骨折SD大鼠Ⅰ型膠原、骨鈣素、TGF-β1mRNA及蛋白的表達(dá)。
　　3.復(fù)元活血湯能刺激骨折SD大鼠能促進(jìn)骨折愈合。4.TGF-β1是骨折愈合過程中軟骨內(nèi)成骨的標(biāo)志性因子