1、斑馬魚胚胎透明，生長速度快，斑馬魚基因與人類基因的相似度達到87％，這些優(yōu)點都足以使斑馬魚成為模式生物越來越受到科學(xué)家的寵愛。TLR(toll—like receptor)是近年來非常受關(guān)注的一種先天性免疫的模式識別受體(PRR： pattern recognition receptor)，在斑馬魚當(dāng)中也發(fā)現(xiàn)了很多的與哺乳動物同源的TLR，因此，通過對斑馬魚TLR信號通路的研究有助我們更加了解斑馬魚和哺乳動物的先天性免疫系統(tǒng)，為疾病的研

2、究提供良好的研究模式。 TIRAP和MyD88是TLR信號通路中兩個非常關(guān)鍵的細(xì)胞內(nèi)銜接分子。本文通過5’RACE獲得了斑馬魚TIRAP分子的全長序列，最大閱讀框包括四個外顯子，共338個氨基酸。序列分析發(fā)現(xiàn)與哺乳動物的TIRAP相比較，斑馬魚TIRAP分子羧基端TIR結(jié)構(gòu)域較為保守，但是在BB環(huán)的頂部保守氨基酸脯氨酸被亮氨酸所取代：氨基端缺乏磷脂酰肌醇二磷酸PIP2結(jié)合位點。Real—Time PCR分析發(fā)現(xiàn)，正常狀態(tài)下，斑

3、馬魚TIRAP遍布于各個組織當(dāng)中，在精巢當(dāng)中表達量相對較高。用Aeromonas salmonicida感染斑馬魚成魚后，TIRAP的組織分布有所變化，仍然遍布于所有的組織器官，但是在腎臟，脾臟，精巢和卵巢中的表達量偏高。 將融合了GFP的斑馬魚TIRAP以及MyD88表達載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，對TIRAP的定位進行研究，結(jié)果顯示斑馬魚TIRAP全長分子遍在分布于整個細(xì)胞，TIRAP的剪接體TIRAP—△(1-105)在整個細(xì)胞

4、質(zhì)中都有表達，而只含有TIR結(jié)構(gòu)域的TIRAP的細(xì)胞定位模式與全長類似。斑馬魚的MyD88分子則聚集成團以點狀的形式特異性散狀地分布于細(xì)胞質(zhì)當(dāng)中。 熒光素酶檢測試驗結(jié)果顯示斑馬魚TIRAP分子不能激活NF—κB，而MyD88能誘導(dǎo)NF—κB大量表達，我們分析認(rèn)為斑馬魚TIRAP分子不能定位在細(xì)胞質(zhì)膜上，從而導(dǎo)致了功能的散失。我們將斑馬魚MyD88第188位即BB環(huán)頂部的脯氨酸突變成了亮氨酸、精氨酸和組氨酸，只有亮氨酸的突變?nèi)匀豢?/p>

5、以傳遞信號，組氨酸和精氨酸的突變都導(dǎo)致信號傳導(dǎo)被抑制，推測BB環(huán)的頂部是疏水性氨基酸(脯氨酸和亮氨酸)的時候，可以進行信號傳遞；當(dāng)被親水性氨基酸(精氨酸和組氨酸)取代時，信號傳遞被抑制。同時利用免疫共沉淀的方法進一步確證斑馬魚TLR4a可以與MyD88相互作用，而不能與TIRAP相互作用。 我們還通過使用了6種純組分(LPS，Zymosan，Glucan，polyI：C，LTA and PGN)刺激斑馬魚成魚，來研究病原微生物與

6、魚類特有TLR分子相對應(yīng)識別的關(guān)系。結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)斑馬魚的TLR21.1、TLR21.2、TLR21.3和TLR21.4可以識別各種不同的微生物包括革蘭式陽性和陰性細(xì)菌、真菌、以及病毒等。斑馬魚特有的TLR21.3在Zymosan的誘導(dǎo)下，表達量高度上調(diào)，因此斑馬魚TLR21.3極有可能是酵母特異的受體分子。免疫共沉淀試驗驗證了斑馬魚TLR21家族的成員都可以和斑馬魚MyD88相互作用。 綜上所述，通過對斑馬魚TLR系統(tǒng)的一些研究