Oligopainting在水稻染色體識別中的應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、染色體涂染技術(shù)即將整條染色體、某條染色體臂(長臂或短臂)或者染色體某個片段的DNA制備成探針,通過熒光原位雜交(FISH)的方法,將探針雜交到染色體上,從而分析和研究染色體的重組、畸變和同源基因。本研究中,我們以水稻為供試材料,通過生物信息學(xué)篩選出了日本晴第9號染色體上25000個的寡核苷酸構(gòu)建成文庫,并將其標(biāo)記為寡核苷酸探針(oligo probe)。通過FISH方法,觀察了日本晴、Chr11L·9L易位系、2個涉及第9號染色體的非整

2、倍體材料以及基因組為AAC的異源三倍體材料中有絲分裂及減數(shù)分裂過程中第九號染色體,揭示了oligopainting在水稻中的應(yīng)用價值,主要研究結(jié)果如下:
  1、在本研究中,我們設(shè)計了能夠覆蓋于日本晴第9號染色體0-23Mb的寡核苷酸文庫,包含25000個寡核苷酸,每個寡核苷酸包含45個堿基,然后經(jīng)過乳化PCR擴增、轉(zhuǎn)錄、反轉(zhuǎn)錄等步驟標(biāo)記為第9號染色體寡核苷酸探針(oligo-chr9)。
  2、oligo-chr9能夠清

3、晰準(zhǔn)確地與日本晴有絲分裂和減數(shù)分裂細(xì)胞中的第9號染色體雜交,并且能夠追蹤第9號染色體在分裂過程各個時期的形態(tài)變化。結(jié)果顯示,該寡核苷酸探針可以應(yīng)用于水稻細(xì)胞學(xué)的相關(guān)研究。
  3、在本研究中,運用oligo-chr9對一個已知的Chr11L·9L易位系進(jìn)行驗證,探究基于寡核苷酸探針的涂染技術(shù)在染色體結(jié)構(gòu)變異方面的應(yīng)用價值。結(jié)果顯示,在該易位系中,oligo-chr9探針能夠分別與兩對染色體的長臂和短臂進(jìn)行特異雜交,并且結(jié)合Cent

4、O探針和5S rDNA探針,說明第9號染色體著絲粒區(qū)域發(fā)生不均等斷裂,11號染色體在5S rDNA區(qū)域發(fā)生斷裂,形成了兩對新染色體,Chr11L·9L和Chr9S·11S,驗證了之前的研究結(jié)果,同時說明該oligo-chr9探針可以應(yīng)用于秈稻品種。
  4、利用oligo-chr9探針對本實驗室若干染色體數(shù)目異常的水稻材料進(jìn)行鑒定,最終鑒定出有兩個與第9號染色體有關(guān)的非整倍體材料,Y6077和Y6089。兩者均呈第9號染色體增多的

5、現(xiàn)象。其中Y6077為增加1條小染色體,由2個第9號染色體短臂所組成的等臂染色體,但其中一個短臂末端的45S rDNA區(qū)域缺失。Y6089增加了4條染色體,其中兩條為第9號染色體短臂形成的等臂染色體,但這2條染色體的著絲粒片段大小不一。
  5、在基因組為AAC的異源三倍體材料中,我們運用oligo-chr9探針與該材料的根尖細(xì)胞染色體做熒光原位雜交,結(jié)果顯示第9號染色體在A組和C組中具有同源性,是相對保守的。運用oligo-ch

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