1、一、奧沙利鉑抗人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480增殖及其機(jī)制研究 目的：觀察抗腫瘤藥物奧沙利鉑對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480體外增殖的影響，初步探討其作用機(jī)制。 方法：采用人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480作為研究對(duì)象，MTT法檢測(cè)不同濃度和作用時(shí)間的奧沙利鉑對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用；AO/EB熒光染色法觀察細(xì)胞形態(tài)的改變；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的分布及凋亡的情況；免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：奧沙利鉑對(duì)SW480細(xì)胞的增殖

2、有抑制作用而且呈劑量和時(shí)間依賴性。奧沙利鉑作用48 h后，電鏡可見(jiàn)凋亡細(xì)胞及凋亡小體；流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞阻滯于S期，G2/M期細(xì)胞減少及出現(xiàn)凋亡峰；免疫印跡法顯示Bax表達(dá)增強(qiáng)，Bcl-2表達(dá)減弱。 二、人結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞系SW480/L-OHP的建立及其生物學(xué)特性 目的：建立人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細(xì)胞系SW480/L-OHP，探討結(jié)腸癌對(duì)奧沙利鉑(Oxaliplatin，L-OHP)產(chǎn)生耐藥的特征規(guī)律和耐藥的機(jī)制。

3、 方法：采用逐步遞增L-OHP濃度，間歇作用體外誘導(dǎo)法培養(yǎng)建立了人結(jié)腸癌L-OHP耐藥細(xì)胞模型SW480/L-OHP。MTT法測(cè)定生長(zhǎng)曲線、交叉耐藥性和耐藥指數(shù)；并用光鏡、電鏡、流式細(xì)胞儀(FCM)等方法觀察其一般生物學(xué)特性的改變。 結(jié)果：歷時(shí)6個(gè)月建成了L-OHP耐藥細(xì)胞模型SW480/L-OHP，其耐藥性能穩(wěn)定，耐藥指數(shù)為6.23；并且與順鉑、5-氟尿嘧啶、阿霉素等多種抗癌藥有不同程度的交叉耐藥性。SW480/L-OHP

4、的細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了改變；體外細(xì)胞群體倍增時(shí)間較親代細(xì)胞延長(zhǎng)26.45 h；細(xì)胞周期分析結(jié)果顯示其G0/G1，G2/M期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少。 三、雷公藤內(nèi)酯醇逆轉(zhuǎn)入結(jié)腸癌SW480/L-0HP細(xì)胞耐藥性的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討雷公藤內(nèi)酯醇( TPL)對(duì)結(jié)腸癌SW480/L-OHP細(xì)胞多藥耐藥(multidrugresistance，MDR)的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制。 方法：采用MTT法檢測(cè)雷公藤內(nèi)酯醇的內(nèi)在細(xì)胞毒性及其對(duì)

5、奧沙利鉑(L-OHP)的增敏作用，并以逆轉(zhuǎn)倍數(shù)(RF)值評(píng)價(jià)其逆轉(zhuǎn)效果；應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞內(nèi)羅丹明123(rhodamine123，Rh123)濃度，免疫印跡技術(shù)檢測(cè)TPL對(duì)耐藥細(xì)胞HSP70表達(dá)的影響。 結(jié)果：TPL在4ng/ml和8ng/ml的無(wú)毒劑量下可明顯增強(qiáng)L-OHP的細(xì)胞毒性，RF分別為2.30和3.91。TPL使耐藥株細(xì)胞內(nèi)Rh123外排減少，積聚增加。TPL作用48h后的SW480/L-OHP細(xì)胞，HSP70