1、目的:
　　單次劑量照射制備大鼠放射性肝纖維化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,觀察造模后各個(gè)時(shí)期大鼠肝功能、肝臟標(biāo)本病理學(xué)形態(tài)、血清學(xué)細(xì)胞因子以及肝臟免疫組化指標(biāo)等改變。并初步探討大鼠造模后相關(guān)細(xì)胞因子及TGF-β1/Smads信號(hào)傳導(dǎo)通路在放射性肝纖維化中的作用,揭示放射性肝纖維化的發(fā)病機(jī)制,為臨床預(yù)防和治療放射性肝纖維化提供理論基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　將60只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組)10只、照射組(B組)50只。

2、除正常對(duì)照組外,B組大鼠用10％水合氯醛0.3ml/100g全麻后,美國(guó)VARIN21-EX直線加速器照射大鼠右半肝,源皮距為100cm,劑量率600cGy/min,30Gy/單次,照射野2.5 cm×2.5 cm,每只動(dòng)物右側(cè)胸腔及胃腸均用鉛塊遮擋,照射后等待大鼠自然蘇醒,A組大鼠只麻醉不進(jìn)行照射。
　　于照射后第2、4、8、12、26周末分批分別剖殺。10%水合氯醛腹腔麻醉(0.3ml/100g體重)后,稱重并記錄,自腹主動(dòng)脈

3、取血,室溫靜置30min,在3000r/min的條件下離心10min,收集上清液置入凍存管中,在-80℃條件下凍存?zhèn)溆?然后檢測(cè)大鼠血清中AST、ALT的活性,ELISA法測(cè)血清中TGF-β1、TNF-α、IL-6、HA、PC-Ⅲ、LN含量,堿水解法檢測(cè)大鼠肝臟組織中Hyp含量;然后立即處死大鼠,迅速切開腹腔。A組10只大鼠于第4周末處死做對(duì)照。取右肝置于10%中性甲醛溶液中固定,常規(guī)石蠟包埋,行HE染色和Masson染色及免疫組化檢測(cè)

4、肝臟組織TGF-β1、Smad3/4/7、PDGF-BB、TIMP-1、MMP13蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　與對(duì)照組(A組)比較,B組受照射肝組織表現(xiàn)出放射性肝炎及肝纖維化,照射組大鼠血清中AST,ALT酶活性和TGF-β1水平自第4周升明顯升高(P<0.05或P<0.01),于第12周末達(dá)到高峰;照射組大鼠血清中HA、PC-Ⅲ、LN含量和肝臟組織中Hyp含量于照射后第4周顯著升高(P<0.05或P<0.01),一直呈

5、上升趨勢(shì),照射后26周值最高;病理結(jié)果顯示,大鼠肝臟病變呈慢性進(jìn)行性肝纖維化改變。免疫組化結(jié)果顯示,照射組大鼠肝臟組織中 TGF-β1、Smad3/4蛋白表達(dá)于照射后第2周開始升高(P<0.05),照射后第12周達(dá)到高峰,26周開始下降;Smad7蛋白表達(dá)于照射后第2周明顯減少(P<0.05),照射后第12周達(dá)最低水平。另外,照射組大鼠肝臟組織中PDGF-BB和TIMP-1蛋白表達(dá)于照射2周升高,照射后26周最高,MMP-13蛋白表達(dá)在