1、肺癌是目前我國常見且預后較差的惡性腫瘤,其中非小細胞肺癌占80％。目前非小細胞肺癌的治療仍以綜合治療為主,雖然手術和放療、化療均取得了一定進展,但是由于其較高的遠處轉移率和局部腫瘤生長控制較差,生存率并沒有得到明顯改善。近年來,隨著分子生物學、細胞生物學和免疫學的發(fā)展,生物治療成為肺癌治療的第四模式。
　　 T細胞介導的細胞免疫在人體抗腫瘤免疫機制中占主要地位。但腫瘤細胞可以通過多種機制逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)視和T細胞攻擊,促進腫瘤細胞

2、的增殖分化。其中免疫負性調節(jié)因子能抑制腫瘤特異性APC激活,促進調節(jié)性T細胞產生,損傷機體抗腫瘤免疫應答。近期研究發(fā)現(xiàn),ILT3在同種異體移植、超敏反應、自身免疫性疾病中通過耐受抗原提呈細胞發(fā)揮免疫抑制作用。但ILT3在實體腫瘤中的研究尚少見。本文通過研究ILT3在非小細胞肺癌中的表達,初步探討ILT3表達與非小細胞肺癌發(fā)生的關系,為進一步研究ILT3在腫瘤發(fā)生、腫瘤免疫逃逸中的作用提供參考。
　　 目的:
　　 以人非

3、小細胞肺癌細胞株A549,H1975,H460,A427及57例非小細胞肺癌腫瘤組織為研究對象,分別從mRNA及蛋白水平檢測ILT3的表達情況,并分析非小細胞肺癌組織中ILT3的表達與各臨床病理參數(shù)之間的關系,尤其是與腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)之間的關系。
　　 方法:
　　 (1)應用RT-PCR檢測ILT3在非小細胞肺癌細胞株A549,H1975,H460,A427 mRNA水平的表達情況。
　　 (2)應

4、用流式細胞術和免疫細胞化學分析ILT3在以上細胞株蛋白水平的表達情況。
　　 (3)應用免疫組化檢測ILT3在非小細胞肺癌組織中的表達情況,并分析ILT3的表達與性別、年齡、腫瘤大小、病理類型、分化程度、臨床分期、淋巴結轉移、TILs等臨床病理參數(shù)之間的關系。實驗數(shù)據(jù)應用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,P＜0.05時認為差異有顯著性。
　　 結果:
　　 (1)NSCLC細胞株A549,H1975,H460,A42

5、7中ILT3 mRNA的表達:RT-PCR結果顯示,以上4個細胞株均有ILT3 mRNA表達。ILT3上下游引物分別位于第3、4外顯子上,擴增產物跨3、4外顯子,片段大小為393bp。
　　 (2)流式細胞術分析結果顯示,ILT3蛋白在以上細胞株中都有較強的表達,陽性率分別為31.31％,22.3296,47.07％,41.59％。其陰性對照陽性率分別為0.89％,0.57％,0.94％,0.39％。蛋白水平的表達陽性率與mRN

6、A半定量結果有相同趨勢。細胞爬片免疫細胞化學結果與流式細胞術分析結果一致,且證實ILT3不僅表達于細胞膜,細胞漿中也大量存在。
　　 (3)ILT3在非小細胞肺癌組織中的表達:
　　 ①57例非小細胞肺癌組織中ILT3陽性表達率為35.1％(20/57)。ILT3在組織中呈彌漫性表達,細胞膜及胞漿均可見陽性顆粒。ILT3陽性表達也見于腫瘤間質浸潤的細胞。但腫瘤周圍正常肺組織中未見ILT3表達,肺良性病變22例未見ILT3

7、陽性表達。
　　 ②ILT3的表達與性別、年齡、腫瘤大小、病理類型、分化程度、臨床分期、淋巴結轉移等臨床病理參數(shù)之間均無相關性。
　　 ③ILT3表達與TILs的關系:ILT3陽性標本中CD45+T數(shù)量為23.65±6.218,明顯低于ILT3陰性標本中51.54±11.864,P＜0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。同時,ILT3陽性標本中浸潤淋巴細胞周圍未出現(xiàn)腫瘤細胞壞死或排異的表現(xiàn),提示這些T細胞是失能的。
　　

8、 結論:
　　 非小細胞肺癌細胞株及組織標本中均有ILT3的表達,組織中ILT3的表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、病理類型、分化程度、臨床分期、淋巴結轉移等各臨床病理參數(shù)之間無關,但與浸潤的CD45+T細胞數(shù)量呈負相關。同時,ILT3陽性標本中浸潤的淋巴細胞周圍未出現(xiàn)腫瘤細胞壞死或排異的表現(xiàn),提示這些T細胞是失能的。因此,ILT3能抑制腫瘤間質中T細胞的浸潤并使之失能,從而介導NSCLC的腫瘤免疫逃逸。清除或封閉腫瘤細胞ILT3