1、目的:
　　 了解乙酰肝素酶蛋白在安徽醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院胸外科2008年1月至2008年12月，手術(shù)取得肺癌標本38例；肺良性病變標本7例；肺正常組織10例中的表達。
　　 研究乙酰肝素酶蛋白的表達同肺癌的臨床病理學(xué)之間的關(guān)系。
　　 研究乙酰肝素酶蛋白在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用。
　　 方法:
　　 收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科2008年1月至2008年12月手術(shù)切取的肺癌標本38例，所有患者

2、術(shù)前均未進行放療或化療，并經(jīng)病理學(xué)診斷確診。鱗癌22例，腺癌12例，腺鱗癌4例；臨床分期按國際抗癌聯(lián)盟(UICC)1997年標準分期，Ⅰ、Ⅱ期20例，Ⅲ期、Ⅳ期18例；高、中分化26例，低分化12例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性11例，陽性27例?；颊吣挲g38～75歲，男性34例，女性4例。另取肺良性病變標本7例（肺炎性假瘤4例、肺結(jié)核2例、肺纖維性瘤1例），正常肺組織10例，均經(jīng)病理證實。標本取得后迅速置于-80°C超低溫冰箱備用。石蠟包埋后制成蠟

3、塊.
　　 采用SP三步法進行免疫組化，主要試劑 兔抗人HPSE抗體購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，通用型SP三步法免疫組化檢測試劑盒購自北京中杉金橋技術(shù)有限公司。操作步驟按照試劑盒說明書進行；取蠟塊做4μm的連續(xù)切片，二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化后置于新鮮配制的3％H2O2溶液室溫浸泡10 min，然后蒸餾水沖洗。將切片放入盛有0.01M檸檬酸鹽緩沖液(pH6.0)抗原修復(fù)液的容器中，置微波爐內(nèi)進行微波修復(fù)30分鐘，室溫下冷卻，P

4、BS(磷酸鹽緩沖液)洗滌。滴加一抗，置于37℃電熱恒溫水箱孵育30min，4℃冰箱過夜。PBS洗滌3次，滴加二抗，置于37℃電熱恒溫水箱孵育10min，PBS洗滌3次，滴加三抗，置于37℃電熱恒溫水箱孵育10min，PBS洗滌，切片在DAB-H2O2中顯色，見棕黃色顆粒后終止反應(yīng)。蘇木精復(fù)染,鹽酸酒精分化，熱水反蘭。常規(guī)脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。每批試驗用PBS液代替一抗作陰性對照。
　　 結(jié)果判斷細胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒者視

5、為陽性染色細胞。高倍鏡下每張切片選擇4個視野，分別計數(shù)陽性細胞數(shù)，進行半定量分級，然后取平均值。采用半定量分級法判定染色結(jié)果，判定標準如下：高倍鏡下胞漿內(nèi)染色情況：①無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；②陽性范圍：<5％為0分，5％～25％為1分，26％～50％為2分，51％～75％為3分，>75％為4分。兩項結(jié)果相加<2分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中度陽性(++)，6～7分為強陽性(+++)。

6、
　　 結(jié)果:
　　 免疫組化染色顯示，乙酰肝素酶蛋白主要定位于細胞質(zhì)、細胞膜；在不同組織中的表達情況有差異。正常肺組織不表達、肺良性病變中表達1例、非小細胞肺癌組織中乙酰肝素酶蛋白表達28例。
　　 三種標本的陽性率分別為00.00％、14.28％、73.68％，非小細胞肺癌組織中乙酰肝素酶蛋白的陽性表達率明顯高于正常肺組織和肺良性病變組織，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 乙酰肝素酶的表達水平與腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移和T

7、NM分期有關(guān)，與患者腫瘤分化程度無明顯相關(guān)性。
　　 結(jié)論:
　　 研究表明，在人類多種惡性腫瘤(乳腺癌、肝癌、惡性黑色素瘤等)中均可檢測到乙酰肝素酶的表達，并與腫瘤的臨床預(yù)后不良相關(guān)。研究結(jié)果顯示：非小細胞肺癌組織中的陽性表達率遠遠高于對照組。
　　 乙酰肝素酶主要定位于胞膜和胞質(zhì)，其中細胞膜染色更深，癌邊緣外肝素酶著色強于中央的部位，推測肝素酶是胞內(nèi)合成后結(jié)合于膜上，在癌發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移時分泌出胞，溶解BM和E