1、本研究主要通過觀察可逆性神經(jīng)阻斷劑和藥物去神經(jīng)對(duì)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈誘發(fā)心肌損傷的影響，探討神經(jīng)因素特別是感覺神經(jīng)在急性缺血性心臟病發(fā)病機(jī)制中的作用。研究主要包括以下三個(gè)方面的內(nèi)容：①、觀察結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈(coronaryarteryocclusion，CAO)后心肌組織、背根神經(jīng)節(jié)P物質(zhì)(substanceP,SP)及mRNA表達(dá)的變化；②、觀察羅哌卡因胸段硬膜外阻滯對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈后心肌損傷的影響；③、觀察辣椒素去神經(jīng)對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈

2、后心肌電活動(dòng)及心肌損傷的影響。 第一部分:結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈誘發(fā)心肌組織、背根神經(jīng)節(jié)P物質(zhì)及mRNA表達(dá)的變化 目的:觀察結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈后心肌組織、背根神經(jīng)節(jié)SP及mRNA(preprotachikininmRNA，β-PPTmRNA)表達(dá)的變化，探討神經(jīng)源性機(jī)制在急性心肌缺血中的作用。 方法:健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈組，根據(jù)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后時(shí)間點(diǎn)的不同，每組又分為0.5、1、3、6h四個(gè)亞組

3、。在預(yù)定時(shí)間內(nèi)取大鼠缺血區(qū)心肌組織和T1-5背根神經(jīng)節(jié)，采用免疫組化(immunohistochemistry，IHC)和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)觀察結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后心肌組織、背根神經(jīng)節(jié)SP表達(dá)的變化。采用實(shí)時(shí)定量PCR(RealtimeRT-PCR)觀察結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后0.5h心肌組織和背根神經(jīng)節(jié)β-PPTmRNA表達(dá)的變化。 結(jié)論:結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后大鼠心肌組織和背

4、根神經(jīng)節(jié)SP及β-PPTmRNA的表達(dá)明顯增加，但心肌組織β-PPTmRNA的表達(dá)顯著低于背根神經(jīng)節(jié)的表達(dá)，提示：①、SP參與了急性心肌缺血傷害性信號(hào)的中樞傳遞，心肌缺血時(shí)心肌組織內(nèi)SP表達(dá)的升高可能主要來自于感覺神經(jīng)末梢的釋放；②、心臟感覺神經(jīng)可能通過神經(jīng)肽的釋放參與心肌缺血病理過程的調(diào)節(jié)。 第二部分:羅哌卡因胸段硬膜外阻滯對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈誘發(fā)心肌損傷的影響 目的:觀察羅哌卡因胸段硬膜外阻滯(thoracicepid

5、uralanesthesia，TEA)對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈后心肌細(xì)胞凋亡、心肌組織腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactoralpha，TNF-α)含量的影響，探討神經(jīng)因素對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈誘發(fā)心肌細(xì)胞損傷的影響及其機(jī)制。 方法:健康雄性SD大鼠72只隨機(jī)分為假手術(shù)組、結(jié)扎冠狀動(dòng)脈組和結(jié)扎冠狀動(dòng)脈+羅哌卡因胸段硬膜外阻滯組。根據(jù)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后時(shí)間點(diǎn)的不同，每組又分為3、6h兩個(gè)亞組。硬膜外干預(yù)組于結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前15mi

6、n硬膜外注射1％羅哌卡因15μl，6h組3h時(shí)追加10μl，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈組硬膜外注射等容積生理鹽水。預(yù)定時(shí)間內(nèi)采血，取缺血區(qū)心肌組織。采用比色法測(cè)心肌組織caspase-3活性和原位末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(terminaldeoxynucleotiyltransferase-mediateddUTPnickendlabeling，TUNEL)觀察心肌細(xì)胞凋亡情況，ELISA法測(cè)心肌組織TNF-α含量。

7、 結(jié)論:羅哌卡因硬膜外阻滯可以減輕結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈誘發(fā)的心肌損傷，提示神經(jīng)因素在心肌缺血損傷過程中發(fā)揮著重要作用。 第三部分:辣椒素去神經(jīng)對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈誘發(fā)心肌電活動(dòng)及心肌損傷的影響 目的:觀察辣椒素去神經(jīng)對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈后心律失常、心肌細(xì)胞凋亡、缺血區(qū)心肌組織SP含量、心功能變化的影響，探討感覺神經(jīng)對(duì)缺血后心肌電活動(dòng)及心肌損傷的影響。 方法:健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照和辣椒素去神經(jīng)組。辣椒素去神經(jīng)組大

8、鼠辣椒素90mg/Kg分三次皮下注射，對(duì)照組給予等容積辣椒素溶劑。三次注射完成后7天選擇甩尾反射潛伏期明顯延長(zhǎng)的大鼠進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。右頸動(dòng)脈插管后建立心肌缺血模型，根據(jù)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后時(shí)間點(diǎn)的不同，每組又分為3、6h兩個(gè)亞組。連續(xù)記錄大鼠心電圖，在預(yù)定時(shí)間內(nèi)采血、取心肌組織。檢測(cè)心肌組織caspase-3活性、心肌細(xì)胞TUNEL染色陽性率和缺血后6h心肌組織SP含量。另外，從兩組動(dòng)物中各隨機(jī)抽取6只大鼠，利用Langendorf體外灌流系統(tǒng)