1、背景與目的：
　　 侵襲性與轉(zhuǎn)移性是惡性腫瘤的兩個(gè)主要特征，也是影響惡性腫瘤患者預(yù)后的關(guān)鍵因素，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的復(fù)雜過(guò)程中受到眾多基因的調(diào)控。腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(MTA1)是新近發(fā)現(xiàn)的與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因，該基因在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中表達(dá)明顯上調(diào)。MTA1具有組蛋白脫乙?；富钚?，調(diào)控組蛋白脫乙?；ㄟ^(guò)影響染色質(zhì)的狀態(tài)來(lái)調(diào)整復(fù)制，從而發(fā)揮其生物學(xué)作用?；|(zhì)降解、細(xì)胞間的粘附及腫瘤的血管生成在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)程中均發(fā)揮著重要作用。

2、本研究通過(guò)檢測(cè)喉鱗癌組織、喉部非典型增生組織及正常黏膜組織中MTA1、MMP-9、β-catenin及EGFR的表達(dá)，以了解這些參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的基因表達(dá)在喉鱗癌發(fā)生發(fā)展的作用及其相關(guān)性。利用RNA干擾技術(shù)及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)觀察MTA1對(duì)HEP-2細(xì)胞生物學(xué)特性變化的影響，進(jìn)一步認(rèn)識(shí)MTA1對(duì)喉癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用。
　　 方法：
　　 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)MTA1蛋白在40例正常喉黏膜上皮、37例喉不典型增生組織及4

3、0例喉鱗癌組織中的表達(dá)水平，分析MTA1在喉鱗癌組織中的作用與臨床分期、分型、病理學(xué)分級(jí)及頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系；采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)MMP-9、EGFR及β-catenin蛋白在40例喉鱗癌組織與喉正常黏膜組織中的表達(dá)，分析MMP-9、EGFR及β-catenin蛋白在喉鱗癌組織中的作用，并分析MTA1與MMP-9、EGFR及β-catenin表達(dá)的相關(guān)性。
　　 在喉癌細(xì)胞株HEP-2細(xì)胞中，采用RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染針對(duì)MTA1

4、的siRNA（MTAl-siRNA），RT-PCR法及western-blot法分別從轉(zhuǎn)錄水平與翻譯水平鑒定其基因沉默效果，并采用MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)等觀察細(xì)胞生物學(xué)特性的改變；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MTA1的表達(dá)質(zhì)粒及干擾質(zhì)粒，挑選陽(yáng)性克隆，進(jìn)行MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞侵襲遷移實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)及劃痕愈合實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)MTA1基因表達(dá)水平的變化，對(duì)腫瘤細(xì)胞

5、生物學(xué)特性的影響。
　　 結(jié)果：
　　 MTA1蛋白表達(dá)于細(xì)胞核中。在喉正常黏膜組織中，MTA1蛋白呈低水平表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為5.0％，而在喉鱗癌組織中，MTA1蛋白陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量及染色強(qiáng)度均明顯增高，陽(yáng)性率達(dá)到67.5％，在不典型增生組織中，MTA1表達(dá)率為37.8％，介于正常組織與喉鱗癌組織之間。MTA1核表達(dá)水平在不典型增生組織與癌組織中的表達(dá)水平均高于喉正常鱗狀上皮組織(p＜0.01)：癌組織中MTA1表達(dá)水平

6、高于不典型增生組織，且統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著(p＜0.01)；MTA1蛋白在從喉正常黏膜組織、不典型增生組織到喉鱗癌組織中的表達(dá)呈進(jìn)行性增加。分析MTA1在喉鱗癌組織中的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系中顯示，在40例喉鱗癌組織標(biāo)本中，MTA1蛋白在低、中及高分化組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為90.0％、72.2％及41.7％，表現(xiàn)為隨著分化程度的增高，其陽(yáng)性表達(dá)率降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=6.141，p＜0.05)；在喉鱗癌原發(fā)灶中MTA1蛋白在伴有頸淋巴

7、結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中陽(yáng)性表達(dá)率為78.6％，而在不伴有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)率為41.7％，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，MTA1蛋白的表達(dá)水平與喉鱗癌患者的頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，MTA1蛋白的高表達(dá)能導(dǎo)致頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生（X2=5.215，p＜0.05）；在與喉鱗癌臨床分期及分型的關(guān)系中，可見(jiàn)MTA1在Ⅰ、Ⅱ期的表達(dá)率較Ⅲ、Ⅳ期低，分別為53.8％、92.9％，但二者之間沒(méi)有差異(x2=0.623，p＞0.05)；MTA1與喉鱗癌臨床分型也無(wú)關(guān)(x2

8、=1.138，p＞0.05)。MMP-9、EGFR及β-catenin在喉鱗癌組織中的表達(dá)率分別為82.5％、87.5％及87.5％，而在喉正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為35.0％、37.5％及35.0％，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)；經(jīng)過(guò)相關(guān)分析顯示，在喉鱗癌中，MTA1與MMP-9、EGFR及β-catenin的表達(dá)呈正相關(guān)(p＜0.05)。
　　 在HEP-2細(xì)胞株，轉(zhuǎn)染靶向MTA1-siRNA后，MTA1基因蛋白及mRNA

9、的表達(dá)水平明顯下降，與空白對(duì)照組及無(wú)義對(duì)照MTA1-NiRNA組相比，MTA1基因的表達(dá)被顯著抑制(p＜0.05)。在檢測(cè)隨后的細(xì)胞生物學(xué)表型中發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染MTA1-sillNA后，細(xì)胞的生長(zhǎng)速度減慢、體外侵襲遷移能力下降、細(xì)胞的體外黏附及克隆形成能力均下降；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MTA1表達(dá)質(zhì)粒及干擾質(zhì)粒后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度在表達(dá)質(zhì)粒組最快，而在干擾質(zhì)粒組最慢，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)中，表達(dá)質(zhì)粒組、對(duì)照組及干擾

10、質(zhì)粒組穿膜細(xì)胞數(shù)量分別為423.6±14.15,301.2±25.4和115.4±15.52；在遷移實(shí)驗(yàn)中的穿膜細(xì)胞數(shù)分別為549.2±21.51,352±25.03和120.8±17.28。在細(xì)胞遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)中，穿膜細(xì)胞數(shù)量最多的是表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，明顯高于對(duì)照組及干擾質(zhì)粒組，干擾質(zhì)粒組中細(xì)胞的穿膜能力最弱，細(xì)胞數(shù)量最少；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)中，表達(dá)質(zhì)粒組、對(duì)照組及干擾質(zhì)粒組中克隆形成數(shù)量分別為168.67±9.5、132.57±5.5和

11、57.33±4.51，可見(jiàn)MTA1的高表達(dá)會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的克隆形成能力，而降低其表達(dá)，則會(huì)導(dǎo)致克隆形成能力的下降；在細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)中，MTA1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的劃痕愈合時(shí)間縮短、黏附能力增強(qiáng)，干擾質(zhì)粒組細(xì)胞劃痕愈合時(shí)間最長(zhǎng)、黏附能力下降。
　　 結(jié)論：
　　 喉鱗癌組織中，MTA1的高表達(dá)在喉鱗癌的惡性進(jìn)展、侵襲轉(zhuǎn)移及頸淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移中起著重要的作用，或許可以作為判斷喉鱗癌惡性程度的一個(gè)分子生物學(xué)標(biāo)志：M

12、MP-9、EGFR及β-catenin蛋白在喉鱗癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，MTA1的過(guò)度表達(dá)與MMP-9、EGFR及β-catenin成正相關(guān)，MTA1過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是與MMP-9、EGFR及β-catenin的異常表達(dá)共同作用的結(jié)果。在人喉癌細(xì)胞株HEP-2中，改變MTA1基因的表達(dá)水平，導(dǎo)致喉癌癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力及其它惡性行為的變化。上調(diào)MTA1基因的表達(dá)，會(huì)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的惡性行為，導(dǎo)致腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移；而抑制其表達(dá)，