1、目的:環(huán)孢菌素A(CsA)通過結(jié)合親環(huán)蛋白D(CYPD)抑制線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔(mPTP)開放，維持線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)和阻止凋亡誘導(dǎo)因子釋放，從而抑制細胞的壞死和凋亡，改善神經(jīng)功能評分。本研究旨在探討環(huán)孢菌素A對大鼠實驗性腦出血的凋亡和壞死信號通路的影響。
　　方法:1.實驗分組:240只雄性SD大鼠(280g-330g)隨機分為Sham組(n=48)、ICH組(n=48)、ICH+Vehicle(n=48)、ICH+CsA5mg組(

2、n=48)、ICH+ CsA10mg組(n=48)五個組。2.模型制作及藥物處理:大鼠腦出血模型是右側(cè)基底節(jié)區(qū)注射0.1ml自體全血（坐標:囟門前0.2毫米，旁3.5毫米和腹側(cè)深5.5毫米）。藥物處理組是術(shù)后15min經(jīng)尾靜脈注射給藥，后每天一次。3.神經(jīng)功能評分:采用華婭教授評分法進行評分，分值越高代表神經(jīng)功能損害越輕，反之，損傷越重。4.腦水含量檢測及腦水腫觀察:腦出血后24h用干濕重法檢測腦水含量。腦出血后24h用MRI檢測腦水腫

3、情況。5.血腦屏障檢測:腦出血后24h用伊文思藍法檢測血腦屏障通透性。6.細胞凋亡檢測:腦出血后72h用TUNEL法檢測細胞凋亡。7.細胞壞死檢測:腦出血后72h用PI法檢測細胞壞死。8.免疫熒光檢測:腦出血后72h用免疫熒光檢測CypD、AIF及核AIF蛋白變化情況。9.免疫印記檢測:腦出血后24h用免疫印記法檢測CypD、AIF及核AIF蛋白表達。10.線粒體觀察:腦出血后72h電鏡觀察線粒體形態(tài)變化。11.細胞形態(tài)觀察:腦出血后7

4、d用NISSL染色和HE染色檢測細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。12.統(tǒng)計分析:采用SSPS17.0軟件，結(jié)果均以(x)±s表示，采用單因素方差分析，組間比較用Student's檢驗分析的方法，P＜0.05為顯著性標準。
　　結(jié)果:1.腦出血后72h神經(jīng)功能評分顯著較Sham組差(p＜0.01)，CsA治療組較ICH組(p＜0.01)、ICH+Vehicle組(p＜0.01)顯著改善。2.腦出血后24h腦水含量顯著較Sham組增加(p＜0.01)，

5、ICH+CsA5mg組、ICH+ CsA10mg組較ICH組(p＜0.01)、ICH+Vehicle組(p＜0.01)顯著降低。腦出血后24h行MRI掃描示腦水腫顯著增強，治療組顯著減輕。3.腦出血后24h血腦屏障通透性較Sham組顯著破壞(p＜0.01)，ICH+ CsA10mg組較ICH組、ICH+CsA5mg組顯著改善(p＜0.01)。4.腦出血后72h凋亡細胞數(shù)較Sham組顯著增加(p＜0.01)，ICH+CsA10mg組較IC

6、H組、ICH+CsA5mg組凋亡細胞數(shù)顯著減少(p＜0.01)，ICH+CsA5mg組較ICH+ CsA10mg組凋亡細胞數(shù)顯著增多(p＜0.01)。5.腦出血后72h壞死細胞數(shù)顯著較Sham組多(p＜0.01)，ICH+ CsA10mg組較ICH組(p＜0.01)、ICH+CsA5mg組(p＜0.01)壞死細胞數(shù)顯著減少，ICH+CsA5mg組較ICH+ CsA10mg組壞死細胞數(shù)顯著增多(p＜0.01)。6.腦出血后24h用免疫印記

7、法檢測CypD、AIF及核AIF蛋白表達較Sham組顯著增加(p＜0.01)，ICH+ CsA10mg組較ICH組(p＜0.01)、ICH+CsA5mg組(p＜0.01)顯著降低。7.腦出血后72h線粒體水腫明顯，ICH+CsA5mg組、ICH+ CsA10mg組線粒體水腫好轉(zhuǎn)。8.腦出血后7d細胞衰減明顯，ICH+CsA5mg組、ICH+CsA10mg組細胞形態(tài)發(fā)生改變且細胞數(shù)目未見顯著衰減。
　　結(jié)論:在ICH模型中，CsA能