1、海洋，作為一種特殊的生長環(huán)境，使海洋生物能夠產(chǎn)生并積累大量具有特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)、特殊生理活性和功能的物質(zhì)，從而提供了一個豐富的新穎結(jié)構(gòu)的化合物庫。近年來，從海洋活性代謝產(chǎn)物中尋找高效的抗癌化合物，直接用于臨床或作為先導(dǎo)物進行結(jié)構(gòu)改造，進而開發(fā)新的高效低毒的抗癌藥物，已經(jīng)成為抗癌藥物研發(fā)的重要領(lǐng)域。
　　 蒽環(huán)類化合物，如表阿霉素(Epirubicin，EPI)，是目前臨床抗腫瘤一線化療藥物，尤其是乳腺癌化療中最常用的藥物，無論在乳腺

2、癌術(shù)前輔助治療、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移治療和早期乳腺癌術(shù)后輔助治療中都占有非常重要的地位。然而，由于目前臨床使用的此類藥物毒性較高，以及耐藥性的出現(xiàn)，促使研究者不斷尋找結(jié)構(gòu)新穎的同類化療替代藥物。
　　 來自海洋紅樹林共生微生物次生代謝產(chǎn)物的SZ-685c是一種結(jié)構(gòu)新穎的蒽環(huán)類化合物。本論文通過體內(nèi)、體外實驗，研究了SZ-685c抗乳腺癌作用，并從誘導(dǎo)細胞凋亡、抑制細胞增殖、導(dǎo)致細胞周期阻滯、調(diào)節(jié)細胞內(nèi)信號通路等方面對其作用機理進行了探討。<

3、br>　　 第一部分SZ-685c對人乳腺癌生長的抑制作用
　　 目的：
　　 研究SZ-685c對于體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-435和其他分別屬于三種不同腫瘤的六株腫瘤細胞系生長的抑制作用以及SZ-685c對于裸鼠體內(nèi)乳腺癌移植瘤生長的抑制作用，了解SZ-685c的抗腫瘤活性。
　　 方法：
　　 1、采用MTT法檢測不同濃度SZ-685c作用下，人乳腺癌細胞系MCF-7、MDA

4、-MB-435和人永生化乳腺上皮細胞MCF-10A細胞活力的變化，研究SZ-685c體外抑制細胞生長的量效關(guān)系。
　　 2、采用MTT法檢測10μM S2-685c作用不同時間后，對人乳腺癌細胞系MCF-7、MDA-MB-435和人永生化乳腺上皮細胞MCF-10A生長的影響，研究SZ-685c體外抑制細胞生長的時效關(guān)系。
　　 3、將SZ-685c與臨床上廣泛應(yīng)用的蒽環(huán)類抗腫瘤藥物EPI進行比較，以上述方法，對于人乳腺癌

5、細胞MCF-7、MDA-MB-435和人永生化乳腺上皮細胞MCF-10A生長抑制活性進行檢測。
　　 4、了解SZ-685c對于其他類型腫瘤細胞生長的抑制作用。觀察SZ-685c對人前列腺癌細胞株P(guān)C-3，入神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株LN-444、U87MG、LN-18，以及人肝癌細胞株Hep-3B、Huh-7生長的影響。
　　 5、研究SZ-685c在體內(nèi)對于人乳腺癌細胞生長的抑制作用。建立裸鼠MDA-MB-435乳腺癌移植瘤模

6、型，將荷瘤裸鼠隨機分為2組，A組：對照組，每三天腹腔注射200μl0.5％ DMSO；B組：SZ-685c實驗組，每三天腹腔注射50 mg/kg SZ-685c(溶于200μl0.5％ DMSO)。共30天，給藥11次。
　　 結(jié)果：
　　 1、SZ-685c對人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-435的生長具有高效抑制作用，且呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性，對MCF-7和MDA-MB-435作用48 hr的IC50分別為7.5

7、μM和3.0μM。而SZ-685c對人永生化乳腺上皮細胞MCF-10A生長的抑制作用較對人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-435要小得多，其IC50為47.9μM。
　　 2、10μM SZ-685c對MCF-7和MDA-M B-435作用不同時間后，隨著作用時間的延長，其抑制作用增強，呈顯著時間依賴性。10μM S2-685c處理72 hr后，MCF-7和MDA-MB-435的生長均已受到顯著抑制，而MCF-10A的生長和

8、活力與對照無顯著差異。
　　 3、與EPI比較發(fā)現(xiàn)，在20μM濃度時，SZ-685c與EPI對乳腺癌細胞系的抑制率相當；但對人永生化乳腺上皮細胞MCF-10A，在20μM時，SZ-685c尚無明顯抑制活性，而EPI對其的抑制率已達到80％。
　　 4、SZ-685c對人前列腺癌細胞株P(guān)C-3，人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株LN-444、U87MG、LN-18，人肝癌細胞株Hep-3B、Huh-7的生長亦具有顯著抑制作用，對于這六株腫

9、瘤細胞系作用48 hr的IC50值均小于15μM。
　　 5、經(jīng)30天給藥11次后，SZ-685c治療組裸鼠瘤重0.65±0.08 g，而對照組裸鼠瘤重為1.69±0.18 g，SZ-685c對裸鼠乳腺癌細胞MDA-MB-435移植瘤的抑制率達61.36％。
　　 結(jié)論：
　　 SZ-685c對于包括人乳腺癌細胞系MCF-7和MDA-MB-435在內(nèi)的四種不同類型的八株腫瘤細胞系的生長均具有高效抑制作用，其抑制作

10、用呈劑量和時間依賴性。對于裸鼠體內(nèi)MDA-MB-435乳腺癌移植瘤的生長，SZ-685c亦具有明顯抑制作用。
　　 第二部分 SZ-685c誘導(dǎo)人乳腺癌細胞的凋亡
　　 目的：
　　 研究SZ-685c對人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-435凋亡的誘導(dǎo)作用，并探討其凋亡作用通路。
　　 方法：
　　 1、采用Annexin V-FITC/PI染色和TUNEL染色檢測SZ-685c對人乳腺癌細

11、胞MCF-7和MDA-MB-435凋亡的誘導(dǎo)作用。
　　 2、采用Western blotting檢測在不同濃度和不同時間的S2-685c處理后，MCF-7、MDA-MB435和MCF-10A細胞中caspase-8，-9，-3和多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose) polerase，PARP]的變化。
　　 3、采用caspase分光光度法或熒光光度法檢測試劑盒分析SZ-685c作用后MCF-7

12、和MDA-MB-435細胞中caspase-8，-9，-3酶活性的變化。
　　 結(jié)論：
　　 SZ-685c能誘導(dǎo)MCF-7和MDA-MB-435細胞凋亡，在此過程中凋亡途徑中的一些關(guān)鍵分子如caspase-8，-9，-3被激活，從而引起PARP蛋白被切割，最終誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。
　　 第三部分 SZ-685c通過阻滯細胞周期抑制人乳腺癌細胞增殖
　　 目的：
　　 研究SZ-685c對人乳腺癌細胞M

13、CF-7和MDA-MB-435的增殖和細胞周期的影響及其相關(guān)的分子改變。
　　 方法：
　　 1、MCF-7和MDA-MB-435經(jīng)不同濃度SZ-685c(0，50％ IC50，100％ IC50，200％ IC50)處理24 hr后，采用5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine，BrdU)摻入法檢測細胞增殖，顯微鏡下觀察SZ-685c對人乳腺癌細胞增殖的影響。
　　 2、收集不同濃度SZ-6

14、85c(0，50％ IC50，100％ IC50)作用24 hr后的MCF-7和MDA-MB-435細胞，碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)染色后以流式細胞儀分析細胞周期，觀察SZ-685c對于MCF-7和MDA-MB-435細胞周期的影響。
　　 3、采用Western blotting檢測不同濃度SZ-685c(0，50％ IC50，100％ IC50，200％ IC50)作用48 hr以及200％ IC50

15、濃度的SZ-685c作用不同時間(0，16 hr，24 hr，48 hr)后，細胞周期調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白細胞周期素D1(Cyclin D1)，周期素依賴激酶4(Cyclin dependent kinases，CDK4)和p-Rb(Ser608) and p-Rb(Ser807/811)的變化。
　　 結(jié)論：
　　 S2-685c能抑制MCF-7和MDA-MB-435細胞增殖，可阻滯MCF-7和MDA-MB-435細胞從G1期

16、進入S期，其作用機制可能是通過抑制MCF-7和MDA-MB-435細胞中Cyclin D1、CDK4的表達以及Rb的磷酸化來實現(xiàn)的。
　　 第四部分 SZ-685c誘導(dǎo)細胞凋亡和增殖抑制的分子通路
　　 目的：
　　 通過研究SZ-685c對Akt/FoxO信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用，探討SZ-685c誘導(dǎo)人乳腺癌細胞凋亡和抑制其增殖的分子機制。
　　 方法：
　　 1、用Western blotting

17、檢測不同濃度SZ-685c(0，50％ IC50，100％ IC50，200％IC50)作用48 hr以及200％ IC50濃度的SZ-685c作用不同時間(0，16 hr，24 hr，48 hr)后，Akt磷酸化水平和總Akt的變化，以及FoxO1和FoxO3a磷酸化水平的改變。
　　 2、用Western blotting檢測SZ-685c作用對FoxO3a下游靶基因Bim表達的影響。
　　 結(jié)論：
　　 S