1、目的:研究荔枝殼原花青素(Procyanidins extracted from the litchi pericarp,LPPC)對載脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E-knock out,apoE-KO)小鼠動脈粥樣硬化病變的保護作用以及對肝臟脂代謝相關基因mRNA表達水平的影響。探討荔枝殼原花青素通過調節(jié)肝臟脂代謝紊亂發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用及其機制。
　　方法:
　　1.雄性C57BL/6小鼠12只,

2、體重18-22g,5周齡;載脂蛋白E基因敲除(apoE-KO)小鼠24只,體重18-22g,5周齡;適應性喂養(yǎng)1w后,將apoE-KO小鼠按體重隨機分為2組。共分3組:A:control組,B:apoE-KO組,C:apoE-KO+LPPC(100mg/kg/d)組。A組C57BL/6小鼠普通飼料喂養(yǎng),B組和C組apoE-KO小鼠高脂飼料(21％脂肪,0.15%膽固醇)喂養(yǎng)。A組和B組給予超濾凈水器凈化后的水灌胃,C組給予LPPC(10

3、0mg/kg/d)溶液灌胃,實驗為期24w,每周記錄小鼠的進水量及進食量,每周稱重一次。
　　2.實驗結束后收集各組小鼠的血液標本,測定血清中的甘油三酯(triglyceride,TG)和總膽固醇(total cholesterol,TC)水平及谷氨酸丙氨酸氨基轉移酶(glutaminateal aninetransaminase,ALT)和天門冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性

4、。分離小鼠腸系膜脂肪,腎周脂肪,睪周脂肪,稱重并計算脂肪/體重比。分離小鼠主動脈血管,取主動脈弓石蠟包埋并制作病理切片,行HE(Hematoxylin-Eosin)染色觀察小鼠主動脈血管動脈粥樣硬化的程度。分離肝臟組織,測定肝臟中TG和TC的水平,并取部分肝臟組織制作冰凍切片用油紅O染色觀察肝臟脂質沉積的情況。
　　3.取小鼠部分肝臟組織,提取組織總RNA,通過實時定量PCR法檢測肝臟中固醇調節(jié)元件結合蛋白-1c(Sterol r

5、egulatory element binding protein,SREBP-lc),乙酰輔酶A羧化酶(Acetyl CoA carboxylase,ACC),膽固醇調節(jié)元件結合蛋白(Sterol regulatory element binding protein,SREBP-2),羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA,HMG CoA reductase),三磷酸腺苷結合盒轉運體

6、A1(ATP-binding cassette transporter-1,ABCA1),肝X受體α(liver X receptorα,LXRα),肝X受體β(liverXreceptorβ,LXRβ),過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator–activated receptorα,PPARα),法尼酯X受體(farnesoid X receptor,FXR),小異源二聚體伴侶受體(small h

7、eterodimer partner,SHP)等基因mRNA的表達水平。
　　結果:
　　1.各組小鼠進食進水量沒有顯著性差異。apoE-KO組小鼠的體重增長量顯著性高于對照組,差異有顯著性(P<0.05)。而LPPC干預的apoE-KO小鼠較未干預的apoE-KO組小鼠體重平均下降了7-8g。
　　2.通過主動脈弓石蠟切片HE染色觀察,我們發(fā)現(xiàn)apoE-KO組小鼠血管內(nèi)壁有大量粥樣斑塊形成,證明我們動脈粥樣硬化模型建

8、立成功。apoE+LPPC組小鼠較apoE-KO組小鼠血管內(nèi)泡沫細胞聚集和粥樣斑塊沉積的情況得到了良好改善,通過肝臟油紅O染色的結果發(fā)現(xiàn)LPPC干預后肝臟脂質浸潤情況也有所改善。
　　3.與control組小鼠相比,apoE-KO組小鼠血清TC和TG含量顯著性升高(P<0.05),血清ALT和AST水平顯著升高(P<0.05),肝臟TC和TG含量顯著升高(P<0.05)。與apoE-KO組小鼠相比,apoE-KO+LPPC組小鼠血

9、清TC、TG含量,ALT水平明顯下降(P<0.05),AST水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),肝臟TC和TG含量均明顯下降(P<0.05)。
　　4.與apoE-KO組小鼠相比,LPPC干預組apoE-KO小鼠肝臟PPARα、FXR、SHP、ABCA1、LXRαmRNA表達水平顯著增加(P<0.05),同時SREBP-2,HMG-CoA還原酶mRNA的表達水平顯著降低(P<0.05)。
　　結論:荔枝殼原花青素對apoE