1、敏誦中閣分類號：R 7 8學科代號：1 0 0 3 0 2Y 9 7 9 8 2 8學校代碼：1 0 6 6 1研究生學號；2 0 0 3 0 9 5薹秀霪警恐碩士研究生畢業(yè)論文變形鏈球菌乳酸脫氫酶與霍亂毒素B 亞單位嵌合表達質粒的構建及轉化煙草研究C o n s t r u c t i o n o f t h eF u s e d V e c t o r o f L a c t a t ed e h y d r o g e n a s

2、 eo f S t r e p t O C O C C U S M u t a n s a n dC h o l e r a’r o x i nB S u b u n i t a n dT o b a c c o T r a n s f o r m a t i o n研 究 生 張燕專 業(yè) 口腔臨床醫(yī)學( 口腔內科學)導 師 劉建國教授指導小組老師 馬欣榮副研究員楊德琴副教授研究起止日期二O o 五年一月至二o o 五年十二月二0 0

3、六年四月中國·遵義變形鏈球菌乳酸脫氫酶與霍亂毒素B 亞單位嵌合表達質粒的構建及轉化煙草研究變形鏈球菌乳酸脫氫酶與霍亂毒素B 亞單位嵌合表達質粒的構建及轉化煙草研究摘 要齲病是人類最常見的細菌感染性疾病之一，嚴重影響著人類健康。變形鏈球菌( 簡稱變鏈菌) 是人類齲病的主要致病菌。免疫防齲是控制齲病的有效手段之一。近年來，利用轉基因植物技術生產可食疫苗的研究日益發(fā)展。轉基因植物疫苗能夠通過直接口服的給藥方式誘導動物和人體的粘膜和系

4、統(tǒng)免疫應答，具有安全、有效、廉價和方便等優(yōu)點，日益顯示出其廣闊的應用前景和潛在的經濟效益。目的：構建含變鏈菌乳酸脫氫酶編碼基因l d h 和粘膜免疫佐劑霍亂毒素B 亞單位編碼基因c t x B 嵌合基因的原核質粒，并轉化E ．c o l i B L 2 1 ( D E 3 ) 經I P T G 誘導表達融合蛋白；構建該嵌合基因的植物表達載體并以根癌農桿菌介導法轉化煙草，獲得轉基因煙草，為下一步利用轉基因植物技術生產可食防齲疫苗的研究打下

5、基礎。方法：本研究共分兩部分：1 ．變鏈菌乳酸脫氫酶和霍亂毒素B 亞單位嵌合基因表達質粒的構建及表達通過基因重組技術構建攜帶有變鏈菌乳酸脫氫酶編碼基因l d h 及霍亂毒素B亞單位編碼基因c t x B 的嵌合基因原核表達質粒并經I P T G 誘導表達融合蛋白。此部分包括5 項內容：①提取變鏈菌基因組D N A 為模板，設計合成引物擴增L D H編碼基因l d h ；②目的基因和載體p E T 3 2 a ( + ) 分別以限制性內切

6、酶K p nI 和S a c I雙酶切后連接，構建質粒p E T - l d h ；③以p B S K ．e t x B 為模板，設計引物擴增目的基因片段c t x B ；④片段c t x B 和質粒p E T - l d h 分別以S a cI 和X h o I 雙酶切后連接，構建重組質粒p E T - l d h - c t x B ，并經酶切、P C R 和插入序列測序分析鑒定。⑤重組質粒p E T - l d h - c t x