1、目的: 探討賴氨酸9、18位點乙?；慕M蛋白H3[(acetyl-histone H3 lys9、lys18)以下簡稱lys9、lys18]在涎腺腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)和正常涎腺中表達的意義及組蛋白去乙?；敢种苿┣乓志谹(TSA)對ACC-2、ACC-M細胞增殖、凋亡及其對ACC-2細胞中p16INK4a基因啟動子甲基化、mRNA、蛋白表達的影響。 方法: 免

2、疫組織化學(xué)方法檢測60例ACC和49例正常涎腺中l(wèi)ys9、lys18的表達并分析其與ACC中E-cadherin、p16INK4a、RASSF1A、DAPK和MGMT基因啟動子甲基化、E-cadherin、p16INK4a蛋白表達及臨床病理特征的關(guān)系。免疫細胞化學(xué)方法檢測ACC-2、ACC-M細胞中l(wèi)ys9、lys18的表達。不同濃度的TSA于不同時間作用ACC-2、ACC-M細胞，MTT法檢測細胞生長抑制率，觀察細胞形態(tài)變化，Anne

3、xin V/PI染色和流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡。甲基化特異性PCR(methylation-specific PCR，MSP)、RT-PCR和實時定量PCR(real-time PCR)、Western-blot方法分析100nmol/l TSA不同處理時間(2h，4h，8h，16h，24h)作用前后ACC-2細胞中p16INK4a基因啟動子甲基化、mRNA、蛋白表達的變化。 結(jié)果: 正常涎腺中導(dǎo)管細胞、腺泡細胞以及AC

4、C腫瘤細胞中均有l(wèi)ys9、lys18陽性表達，表達位于細胞核。經(jīng)統(tǒng)計，lys9、lys18在正常涎腺中的表達明顯高于ACC，且正常涎腺中l(wèi)ys9的表達較lys18高。ACC中l(wèi)ys9的表達與p16INK4a啟動子甲基化呈顯著負相關(guān)。Lys9、lys18表達與ACC的臨床病理特征沒有相關(guān)性。ACC-M細胞中無lys9的表達，lys9、lys18在ACC細胞系中的表達較低。TSA能有效抑制ACC-2、ACC-M細胞的增殖，使細胞形態(tài)發(fā)生明顯

5、改變，抑制作用呈明顯的濃度和時間依賴性。100nmol/l TSA不同處理時間作用ACC-2、ACC-M細胞，細胞凋亡率逐漸增高，呈時間依賴性。TSA對ACC-M的增殖抑制作用強于ACC-2。100nmol/l TSA處理ACC-2細胞2～16h后，p16INK4a基因啟動子甲基化消失；處理2～24h后，p16INK4a mRNA、蛋白表達顯著增高。 結(jié)論: 組蛋白H3 lys9、18位點低乙?；贏CC腫瘤發(fā)生中發(fā)揮著

6、作用。正常涎腺中組蛋白H3不同位點的乙酰化程度不同，ACC中組蛋白低乙?；蓞f(xié)同DNA甲基化對p16INK4a基因發(fā)揮作用，但p16INK4a 基因的失活可能是多種機制共同參與。TSA能顯著抑制ACC-2、ACC-M的增殖，可作為抗腫瘤的輔助藥物。誘導(dǎo)細胞凋亡為TSA抑制ACC-2、ACC-M增殖的機制之一。TSA能通過改變組蛋白乙?；乃接绊憄16INK4a基因啟動子甲基化的水平，使p16INK4a基因表達升高，從而影響細胞周期，可