1、研究背景： 糖尿病腎病(DN)是糖尿病主要并發(fā)癥之一，早期糖尿病腎病病理特點(diǎn)為腎臟肥大，細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在腎小球及小管間質(zhì)積聚，進(jìn)而發(fā)展成腎臟纖維化。其發(fā)病機(jī)制未明，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)及其下游絲／蘇氨酸激酶受體(smad)信號(hào)通路在DN發(fā)病中的作用不容忽視。在糖尿病中，高血糖、糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)、血管緊張素Ⅱ等因素可能引起Smads信號(hào)通路激活。TGF-p／Smad信號(hào)傳導(dǎo)與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成及降解有

2、關(guān)，有研究表明，下調(diào)Smad信號(hào)通路，可以減少ECM的積聚。TGF-β、Smad2/Smad3和Smad4通過(guò)刺激腎小管上皮細(xì)胞誘導(dǎo)膠原合成，而Smad7表達(dá)增高可抑制Smad2/Smad3和Smad4的激活，減少Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達(dá)和成纖維細(xì)胞的聚集。此外，TGF-β/Smad信號(hào)傳導(dǎo)的激活，可以刺激小管上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，參與腎臟間質(zhì)纖維化。糖尿病腎病腎臟受損后，存在微炎癥狀態(tài)，Smad信號(hào)傳導(dǎo)通路參與了腎臟微炎癥反應(yīng)，Sma

3、d7的過(guò)度表達(dá)可能起到重要的抗炎作用。 本研究擬觀察鏈脲佐菌素(STZ)造模的糖尿病大鼠腎臟組織中Smad2,Smad4,Smad7蛋白的表達(dá)，探討Smads信號(hào)通路在糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制中的作用。 研究方法： 24只6周齡雄性SD大鼠(清潔級(jí))購(gòu)自杭州師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房，平均體重(200.26±18.78)，抽簽法選取12只大鼠造糖尿病模型，以55mg／kg腹腔注射鏈脲佐菌素，注射后72小時(shí)取尾靜脈血測(cè)定，一只

4、大鼠血糖≤16.7mmol／L，排除出本實(shí)驗(yàn)，剩余11只血糖均≥16.7mmol／L，確定造模成功，為糖尿病組(DM)，健康對(duì)照組(CG)為12只。糖尿病大鼠不應(yīng)用任何降糖藥物。第12周末，兩組大鼠入代謝籠收集24小時(shí)尿量，測(cè)定24小時(shí)尿白蛋白排泄量，第二天空腹秤體重，處死，采腹主動(dòng)脈血。取雙側(cè)腎臟秤重。血液分離血清測(cè)血糖(GLU)、血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、血甘油三酯(TP)。腎組織經(jīng)固定，3um切片，一部分用免疫組化(SP

5、、SABC)法對(duì)糖尿病腎病SD大鼠腎臟Smad2,Smad4,Smad7蛋白進(jìn)行半定量分析。其余切片行HE染色鏡下觀察兩組大鼠的腎臟組織學(xué)結(jié)構(gòu)。 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.5，統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組數(shù)據(jù)經(jīng)單樣本K-S分析均符合正態(tài)分布，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.01為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組化學(xué)采用IPP(Image pro plus，Media cybernetics公司)圖象分析軟件分析，每張玻片隨機(jī)選取5個(gè)視野

6、分析，測(cè)定平均光密度，結(jié)果用mean±SD表示。 研究結(jié)果： 1、各組大鼠體重，一腎重，體重／腎重，24小時(shí)白蛋白排泄的變化： 造膜后12周，糖尿病組體重較正常組明顯降低(P＜0.01)，而腎重與體重的比率及UAE比正常對(duì)照組高(P＜0.01)，兩組腎重相比差別無(wú)顯著性意義。 2、各組大鼠GLU、BUN、SCr、TP的變化： 12周后，糖尿病組GLU、BUN、較正常組明顯升高(P＜0.01)，SC

7、r較正常組增高，有差異(P＜0.05)，兩組間TP差別無(wú)顯著性意義。 3、各組大鼠腎臟組織中Smad2,Smad4,Smad7蛋白表達(dá)的比較：糖尿病組的Smad4、Smad7在腎臟組織的表達(dá)較正常組明顯增高P＜0.01，但Smad2在兩組間相比差別無(wú)顯著性意義。 4、兩組大鼠腎臟組織形態(tài)學(xué)改變HE染色鏡下觀察可見(jiàn)，正常組大鼠腎臟組織學(xué)結(jié)構(gòu)正常，未發(fā)現(xiàn)相關(guān)的糖尿病腎病病理變化。STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠則出現(xiàn)了明顯的糖尿病腎