1、目的：運(yùn)動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng)病變、廣泛軟組織損傷和嚴(yán)重?zé)齻榷喾N疾病均可導(dǎo)致相關(guān)神經(jīng)支配的骨骼肌暫時(shí)性或者永久性失神經(jīng)支配，引起患者對(duì)肌松藥的敏感性異常。骨骼肌的乙酰膽堿受體有成人型(ε-AChR)和胎兒型(γ-AChR)兩種亞型。當(dāng)骨骼肌發(fā)生失神經(jīng)支配時(shí)，可出現(xiàn)乙酰膽堿受體總量和亞型的改變，但是失神經(jīng)支配后不同時(shí)間點(diǎn)肌細(xì)胞表面受體數(shù)量和兩個(gè)受體亞型的變化趨勢(shì)并不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬觀察失神經(jīng)支配后骨骼肌受體總量和亞型的變化及與失神經(jīng)時(shí)間的關(guān)系，并探討

2、這種變化對(duì)不同化學(xué)結(jié)構(gòu)肌松藥效應(yīng)的影響，從受體水平說(shuō)明有關(guān)疾病對(duì)肌松藥敏感性異常的原因。 方法：①采用細(xì)胞內(nèi)微電極記錄方法觀察失神經(jīng)支配不同時(shí)間點(diǎn)幾種不同類(lèi)型和不同化學(xué)結(jié)構(gòu)肌松藥對(duì)骨骼肌動(dòng)作電位幅度(APA)的抑制作用。②采用RT-PCR和western blot方法觀察失神經(jīng)支配后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)骨骼肌細(xì)胞上ε-AChR和γ-AChR mRNA和蛋白表達(dá)的變化。③將ε-AChR和γ-AChR分別表達(dá)在HEK293細(xì)胞上，篩選出能穩(wěn)定

3、表達(dá)兩種受體的細(xì)胞株，采用全細(xì)胞膜片鉗來(lái)觀察不同類(lèi)型肌松藥對(duì)兩種受體作用的差異。 結(jié)果：⑴維庫(kù)溴銨、阿曲庫(kù)銨、羅庫(kù)溴銨和琥珀膽堿劑量依賴(lài)性地抑制大鼠骨骼肌APA幅度；失神經(jīng)支配后骨骼肌細(xì)胞對(duì)非去極化肌松藥(羅庫(kù)溴銨、維庫(kù)溴銨和阿曲庫(kù)銨)的敏感性降低，14d～21d敏感性降至最低。而骨骼肌細(xì)胞對(duì)去極化肌松藥(琥珀膽堿)的敏感性先增加后降低，7～21d敏感性逐漸增高，以后降低。⑵失神經(jīng)支配后14d AChR總量開(kāi)始明顯增加，并且一直

4、維持在較高水平；γ-AChR表達(dá)逐漸增加；ε-AChR表達(dá)先減少再增加。⑶篩選出有6株轉(zhuǎn)染ε-AChR的細(xì)胞和3株轉(zhuǎn)染γ-AChR的細(xì)胞株。維庫(kù)溴銨對(duì)ε-AChR作用的IC50值小于對(duì)γ-AChR作用的IC50值。琥珀膽堿對(duì)兩種受體抑制作用無(wú)顯著性差異。 結(jié)論：①在肌肉失神經(jīng)支配的7～21d對(duì)不同阻滯性質(zhì)的肌松藥敏感性變化是不一樣的，對(duì)去極化肌松藥敏感性增加而對(duì)非去極化敏感性降低。②失神經(jīng)支配后骨骼肌細(xì)胞對(duì)肌松藥敏感性的改變與骨