1、背景：甲狀腺相關(guān)性眼病(thyroid associated ophthal—mopathy，TAO)又名Graves眼病(Graves’ophthalmopathy，GO)是一種器官特異性自身免疫性疾病[1]。其癥狀表現(xiàn)為甲狀腺腫大、眼球突出、高代謝綜合征，脛前粘液性水腫等。有研究表明，TAO是一種器官特異性的自身免疫性疾病，為細(xì)胞及體液免疫在遺傳和環(huán)境等因素條件下同時(shí)作用的結(jié)果[2]。TAO主要的病理變化為眼眶后結(jié)締組織和眼外肌的免

2、疫炎性反應(yīng)，其發(fā)病涉及多種因素。因此，TAO已成為內(nèi)分泌疾病中一個(gè)研究的重要課題，本實(shí)驗(yàn)從Th1/Th2細(xì)胞因子的角度將其與中醫(yī)辨證分型結(jié)合在一起，尋找積極有效的治療 TA O的新方法，為TA O在中醫(yī)上的治療提供依據(jù)。
　　目的：本研究在前期臨床和實(shí)驗(yàn)有效基礎(chǔ)上，從拮抗 Th1細(xì)胞因子 IFN-γ和Th2細(xì)胞因子 IL-4對(duì)RFs生物學(xué)活性影響，調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡方面，探討瀉火平突散、活血平突散、養(yǎng)目平突散治療 TAO的機(jī)制

3、。以及觀察三種中藥復(fù)方對(duì)IFN-γ、IL-4刺激后 RFs增殖的影響和對(duì) IFN-γ、IL-4刺激后 HA和I、Ⅲ型膠原及 MMPs、TIMPs等細(xì)胞外基質(zhì)合成的影響。
　　方法：
　　1.原代培養(yǎng)RFs并進(jìn)行鑒定。眼球后結(jié)締組織取眼外傷或其他眼部手術(shù)病人，實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞在2-8代間。采用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及免疫細(xì)胞化學(xué)染色法其鑒定。
　　2.RFs與三種中藥復(fù)方含藥血清的不同劑量（10％，20%，30%）一起孵

4、育48小時(shí)后，MTT比色法檢測(cè)，確定最佳劑量。
　　3.RFs與 IFN-γ、IL-4及含藥血清刺激后 MTT比色法檢測(cè)中藥血清對(duì) RFs活力影響。
　　4.RFs與IFN-γ(200U/mL)、IL-4(200U/mL)以及三種含藥血清共同孵育48小時(shí)后Elisa法檢測(cè)IFN-γ、IL-4對(duì)HA和Ⅰ、Ⅲ型膠原合成的影響。
　　5.RFs與IFN-γ(200U/mL)、IL-4(200U/mL)以及三種含藥血清共同孵育

5、48小時(shí)后，免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè) IFN-γ、IL-4和和三種含藥血清對(duì) MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.體外成功培養(yǎng)正常人眼眶后成纖維細(xì)胞，光鏡下觀察從組織塊四周長(zhǎng)出的細(xì)胞，呈放射狀，細(xì)胞形狀為梭形和大多角形，10-14天細(xì)胞逐漸生長(zhǎng)融合成單層鋪滿培養(yǎng)瓶底。細(xì)胞鑒定結(jié)果顯示纖維原細(xì)胞的標(biāo)記 vimentin為陽(yáng)性，cytokeration為陰性，提示為純凈的RFs。

6、>　　2.中藥復(fù)方含藥血清對(duì)RFs有抑制作用，并在中劑量時(shí)最為明顯。
　　3.IFN-γ、IL-4刺激后對(duì)RFs有增殖作用，加入含藥血清后對(duì)RFs的增殖有抑制作用。
　　4. IFN-γ、IL-4能夠刺激HA和I、Ⅲ型膠原的合成和分泌，三種中藥復(fù)方含藥血清干預(yù)后HA和I、Ⅲ型膠原的表達(dá)均下降。
　　5. IFN-γ、IL-4刺激后MMPs、TIMPs細(xì)胞外基質(zhì)合成紊亂，中藥復(fù)方含藥血清干預(yù)后調(diào)節(jié)使其平衡。
　　結(jié)