1、研究目的:將胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為多巴胺神經(jīng)元,并作為供體細(xì)胞移植治療帕金森病。
　　內(nèi)容及方法:將小鼠胚胎干細(xì)胞通過(guò)無(wú)血清誘導(dǎo)體系進(jìn)行神經(jīng)分化,并在誘導(dǎo)因子SHH及FGF8的作用下產(chǎn)生多巴胺神經(jīng)元;將誘導(dǎo)分化的多巴胺能細(xì)胞定向移植6-OHDA單側(cè)損毀帕金森病大鼠紋狀體,評(píng)估移植2周、4周及8周后細(xì)胞存活率及PD大鼠行為學(xué)變化;分析紋狀體細(xì)胞移植區(qū)域炎癥因子的變化及其與細(xì)胞存活率的關(guān)系;研究營(yíng)養(yǎng)元素硒在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中能否抑制LP

2、S誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活;進(jìn)一步研究硒能否抑制帕金森病大鼠細(xì)胞移植后的炎癥反應(yīng);研究硒能否通過(guò)抗炎作用保護(hù)體外分化的多巴胺神經(jīng)元;研究硒能否在PD大鼠模型中促進(jìn)多巴胺神經(jīng)元移植后的存活,能否利于細(xì)胞移植后PD鼠行為學(xué)恢復(fù);慢病毒介導(dǎo)的lmxlb轉(zhuǎn)錄因子在胚胎干細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)能否促進(jìn)多巴胺神經(jīng)元表型的出現(xiàn)。
　　結(jié)果:無(wú)血清的誘導(dǎo)分化方法能有效的提高ESC向NPC細(xì)胞的分化效率,并產(chǎn)生rosette樣結(jié)構(gòu),約95％的細(xì)胞Nestin陽(yáng)

3、性,對(duì)NPC細(xì)胞經(jīng)SHH及FGFgb誘導(dǎo)可以得到約占總細(xì)胞18％的DA神經(jīng)元。ESC來(lái)源的DA能細(xì)胞移植6-OHDA大鼠PD模型2周后存活率僅20％,4周及8周后進(jìn)一步下降。同時(shí),在細(xì)胞移植區(qū)發(fā)現(xiàn)有大量的CD11b陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞的聚集,并且iNOS及TNF-α等炎癥因子表達(dá)量也有所上升。在BV2細(xì)胞中,硒能夠濃度依賴性的抑制LPS誘導(dǎo)的iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β、NO等致炎因子的產(chǎn)生,還可以有效抑制NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通

4、路的激活。在6-OHDA大鼠模型細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)中,硒也能夠顯著抑制移植區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞的激活及炎癥因子的產(chǎn)生,增加DA神經(jīng)細(xì)胞移植后的存活率。PD動(dòng)物行為學(xué)分析表明,硒聯(lián)合細(xì)胞移植治療更能有效的促進(jìn)6-OHDA大鼠旋轉(zhuǎn)行為的改善。慢病毒介導(dǎo)的1mx1b的表達(dá)可以促進(jìn)DA神經(jīng)元表型的出現(xiàn)。
　　結(jié)論:無(wú)血清神經(jīng)誘導(dǎo)分化方法是安全有效的神經(jīng)分化方法;硒可能通過(guò)抑制移植后炎癥反應(yīng)促進(jìn)移植細(xì)胞的存活;1mx1b在DA神經(jīng)元發(fā)育過(guò)程中可能有重要