1、目的：維生素E琥珀酸酯(VitaminEsuccinate，VES；a-tocopherylSuccinate，a-TOS)是一種維生素E的衍生物，研究證實，VES對惡性腫瘤如B淋巴瘤、前列腺癌、子宮內(nèi)皮細胞癌、胃癌和結(jié)腸癌等都具有顯著的凋亡誘導(dǎo)作用，而對機體正常細胞無毒性。本研究旨在觀察VES對乳腺癌MCF-7(雌激素受體陽性)和MDA-MB-435(雌激素受體陰性)細胞的增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)作用，并分析VES調(diào)控Fas蛋白的表達在凋亡

2、誘導(dǎo)過程中的作用。 方法：人乳腺癌細胞株MCF-7(雌激素受體陽性)以及人乳腺癌細胞株MDA-MB-435(雌激素受體陰性)以RPMI1640培養(yǎng)基孵育，至對數(shù)生長期時，分別以VES刺激12h，24h和48h，VES濃度為5μg/ml，10μg/ml和20μg/ml，用MTT法測定VES對細胞的增殖抑制作用；VES處理結(jié)束后，收集細胞制成單細胞懸液，加入碘化丙叮(PI)后以流式細胞儀分析細胞周期并計算凋亡率的變化。為檢測Fas分

3、子在VES誘導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡過程中的作用，以Fas中和性抗體進行阻斷實驗。為檢測VES作用后Fas蛋白水平的變化，以5μg/ml，10μg/ml和20μg/mlVES處理乳腺癌細胞48h后，裂解乳腺癌細胞后收集蛋白并進行定量分析，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白后以半干式電轉(zhuǎn)移將蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，以Western蛋白印跡法檢測Fas蛋白水平。由于細胞的凋亡主要由細胞表面的膜Fas介導(dǎo)，VES作用結(jié)束后加入PE標記的Fas抗體，以流式

4、細胞儀分析熒光強度以測定細胞表面Fas表達水平的變化。 結(jié)果：VES對乳腺癌細胞的增殖抑制作用與雌激素受體的表達無關(guān)，MCF-7和MDA-MB-435乳腺癌細胞經(jīng)VES作用后均表現(xiàn)為顯著的抑制作用，并表現(xiàn)為時間和劑量依賴關(guān)系。MCF-7乳腺癌細胞的自然凋亡率為1.2％，5μg/ml，10μg/ml和20μg/ml的VES作用48h后凋亡率分別升高至11.2％，16.4％和41.2％；MDA-MB-435細胞的自然凋亡率為1.5％

5、，經(jīng)VES作用48h后凋亡率升高至13.1％、20.2％和46.5％。加入Fas中和性抗體與VES共同作用于乳腺癌細胞后，VES介導(dǎo)的凋亡誘導(dǎo)作用被明顯阻斷。經(jīng)Western蛋白印跡法檢測Fas蛋白水平發(fā)現(xiàn)，與未經(jīng)藥物處理的空白對照組細胞相比，5μg/ml，10μg/ml和20μg/mlVES作用48h后乳腺癌MCF-7細胞Fas蛋白水平分別升高2.3，2.7和2.9倍；而MDA-MB-435細胞Fas蛋白水平分別升高1.3、1.9和4

6、.3倍。不同濃度VES作用48h后MCF-7細胞表面Fas平均熒光強度顯著增強，由對照組的50.07升高至54.72、71.68和86.84；而MDA-MB-435細胞表面Fas平均熒光強度亦顯著增強，由對照組的46.29升高至59.66、84.54和103.41。 結(jié)論：VES對雌激素受體陽性與雌激素受體陰性的乳腺癌細胞均具有顯著的增殖抑制作用并表現(xiàn)為時間和劑量依賴關(guān)系，其增殖抑制作用主要與誘導(dǎo)癌細胞的凋亡有關(guān)。阻斷實驗提示F