1、男性不育是由環(huán)境因素和遺傳因素綜合所致的復雜疾病，排除臨床上常規(guī)檢查能獲知的病因外，仍有約40％的患者不育原因尚不清楚。由于無法對“癥”下藥，該部分患者臨床治療效果并不理想，因此輔助生殖技術成為其得到后代的首選。但是，輔助生殖技術并不能揭示發(fā)病原因，而且還存在致病基因垂直傳播的可能。因此只有從包括營養(yǎng)因素在內的環(huán)境和遺傳雙重角度揭示發(fā)病機理，尋找致病/易感基因，才是治療和預防男性不育的根本所在。葉酸作為一種營養(yǎng)因素，可有效預防新生兒神經

2、管閉合缺陷的發(fā)生，在很多國家已經成為育齡女性的必補品。但是關于葉酸在男性生殖中的報道卻十分有限。動物實驗表明，用葉酸缺乏的飲食飼養(yǎng)大鼠或小鼠，可導致其精子密度和活力下降；葉酸代謝過程中的限速酶—亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)在小鼠睪丸中的活性是其他組織的5倍，MTHFR基因敲除小鼠表現為嚴重的生精障礙和雄性不育。目前，在人類精漿和前列腺中己發(fā)現有高親和力的葉酸結合蛋白，精漿中葉酸的濃度是血漿中的1．5倍，而且適當補充葉酸可明顯改善精

3、液質量。這一系列實驗提示：葉酸和葉酸代謝循環(huán)在男性生殖中發(fā)揮重要作用。鑒于此，我們檢測了500份精漿(包括精子密度正常的個體285例和少精癥患者215例)中葉酸的含量，并分析了葉酸代謝相關基因MTHFR，MS(蛋氨酸合成酶編碼基因)和TYMS(胸腺嘧啶核苷酸合成酶編碼基因)在正常已育人群和男性不育患者中的多態(tài)性分布。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：經過嚴格篩選，我們收集并篩選到少精癥患者精漿215份，精子密度正常個體精漿2

4、85份。采用微生物法檢測了精漿總葉酸和非甲基四氫葉酸的濃度，發(fā)現總葉酸在嚴重少精癥患者和精子密度正常個體中存在統(tǒng)計學差異(p=0．047)，但是非甲基四氫葉酸濃度在患者組與對照組中沒有差異。同時，我們分析了對照組與患者組精漿鋅濃度，發(fā)現無精癥患者鋅濃度高于對照組，兩者具有顯著性差異(p=0．004)。分析血漿HCY發(fā)現，HCY在患者組與對照組中沒有差異。
　　 第二部分：經過嚴格篩選，我們排除了臨床病因已知的患者血樣，共收集臨床

5、原因不明男性不育患者血樣491例和正常已育男性血樣430例。應用聚合酶鏈式反應—限制性酶切片段長度多態(tài)性(PCR—RFLP)的方法研究了MTHFR基因C677T位點和A1298C位點，MS基因A2756G位點以及TYMS3’UTR端缺失/插入位點的多態(tài)性分布，結果發(fā)現：對于C677T位點來說，等位基因T在患者組中的分布頻率為65．47％，在對照組中為55％，兩者具有顯著差異(p<0．001)?；蛐头治霰砻?，純合突變基因型TT、雜合基因

6、型CT以及整合后的基因型CT+TT在患者組和正常對照組表現出極顯著差異(均為p<0．001)，提示MTHFR基因C677T位點可能作為男性不育的風險位點。對于A1298C來說，等位基因C的分布頻率在患者組和對照組中具有極顯著差異(p<0．001)；基因型分析表明，純合突變基因型CC、雜合突變基因型AC以及整合后的基因型在患者組和對照組同樣具有極顯著性差異(均為p<0．001)，提示MTHFR基因A1298C位點可能是男性不育的風險位點。

7、因為MTHFR基因C677T位點和A1298C位點均與男性不育表現出相關性，所以我們對這兩個位點進行了聯合分析，分析結果顯示，兩個位點具有聯合作用，隨著等位基因突變個數增多，患病的風險就會增大(P<0．001)。分析MTHFR基因C677T位點和A1298C位點構成的單倍型時發(fā)現，677T/1298A和677C/1298A分別為患者和正常組的常見單倍型。單倍型677T/1298C和677C/1298C在患者組與正常對照組間有極顯著性差異