1、目的探討肌肌醇加氧酶(MIOX)在糖尿病腎臟病變過程中表達的變化及其在腎小管間質纖維化形成中的作用。 方法:(1)在體內，應用鏈脲佐菌素(STZ)誘導SD大鼠建立糖尿病(DM)大鼠模型，隨機分為DM組和糖尿病腎病(DN)組，并設正常組作為對照，分別觀察4周(DM組)和12周(DN組)，測定血尿素氮、肌酐、血糖和24 h尿微量白蛋白、尿肌酐。取大鼠的腎皮質，病理切片染色觀察腎小管間質的變化。提取腎皮質組織總RNA和蛋白，Real-

2、time RT-PCR比較正常SD大鼠、DM大鼠和DN大鼠腎皮質MIOX mRNA表達的變化；分別用RT-PCR和Western blot檢測α-SMA、E-cadherin、fibronectin mRNA和α-SMA、E-cadherin蛋白表達的改變。 (2)在體外培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細胞NRK-52E，分別在不同時間和用不同濃度的高糖刺激NRK-52E細胞，并設正常細胞組和甘露醇組作為對照，提取細胞總RNA和蛋白，RT-PCR檢測

3、MIOX、α-SMA、E-cadherin、fibronectin mRNA表達的變化；Western blot檢測α-SMA、E-cadherin蛋白表達的改變。(3)構建MIOX基因重組質粒pcDNA3.1-MIOX，穩(wěn)定轉染NRK-52E細胞，RT-PCR和Western blot分別比較轉染重組質粒pcDNA3.1-MIOX、空載質粒pcDNA3.1的NRK-52E細胞與正常NRK-52E細胞中α-SMA、E-cadherin

4、、fibronectin mRNA和α-SMA、E-cadherin蛋白表達的變化；設計針對MIOX基因的反義寡脫氧核苷酸(anti-sense oligodeoxynucleotide，ASODN)和正義ODN(SODN)，分別轉染正常NRK-52E細胞，8h后再用高糖刺激，并與高糖刺激的正常NRK-52E細胞相比，RT-PCR和Western blot檢測轉染ASODN、轉染SODN的NRK-52E細胞α-SMA、E-cadheri

5、n、fibronectinmRNA和α-SMA、E-cadherin蛋白表達的改變。 結果:(1)與正常對照相比，DM大鼠尿微量白蛋白、血肌酐開始升高，而DN大鼠升高更明顯；腎臟病理切片Masson染色顯示，DN大鼠已出現腎小管間質纖維化的改變；Real-time RT-PC發(fā)現，與正常對照相比，DM大鼠腎皮質中MIOXmRNA表達增高，DN大鼠升高更明顯；與正常對照相比，DM大鼠、DN大鼠腎皮質中α-SMA mRNA和蛋白、f

6、ibronectin mRNA的表達增加、E-cadherin mRNA和蛋白的表達減少，差異均具有顯著性(P值均<0.01)。(2)與正常NRK-52E細胞組和甘露醇對照組相比，高糖呈時間和濃度依賴性刺激NRK-52E細胞的MIOX mRNA、α-SMA mRNA和蛋白、fibronectin mRNA的表達增加；E-cadherin mRNA和蛋白的表達減少。差異均具有顯著性(P值均<0.05)。(3)與轉染空載質粒和正常細胞相比，

7、轉染重組質粒pcDNA3.1-M10x的NRK-52E細胞α-SMA mRNA和蛋白、fibronectin mRNA的表達增加； E-cadherin mRNA和蛋白的表達減少。差異均具有顯著性(P值均<0.05)。轉染ASODN能明顯抑制正常NRK-52E細胞高糖刺激后MIOX蛋白的表達；與轉染SODN細胞和高糖刺激的正常細胞相比，轉染ASODN的NRK-52E細胞高糖刺激后α-SMA mRNA和蛋白、fibronectin mRN