1、【目的】本實驗以活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）對細胞產(chǎn)生的傷害為出發(fā)點，通過添加不同種類不同濃度抗氧化劑，從而確定適合延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液的最佳添加濃度，評價其對體細胞克隆胚胎發(fā)育潛力的影響，致力于解決細胞由于過氧化物的存在而造成的發(fā)育阻滯（Development Block），減少氧化應激（Oxidative Stress，OS），提高體細胞克隆效率。
　　【方法】將經(jīng)體細胞克隆操作

2、所形成的胚胎隨機放在不同種類、不同濃度抗氧化劑條件下進行體外培養(yǎng)，觀察其卵裂率及囊胚率，并對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。
　　【結(jié)果】
　　1.在延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的N-乙酰-L-半胱氨酸（N-Acetyl-L-Cysteine，NAC）對延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗中，結(jié)果顯示，0.6mM一組在重組胚的卵裂率及囊胚發(fā)育率方面均顯著高于其它濃度組（P<0.05），所以確定0.6mM是單獨

3、使用NAC時最適合于延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　2.在延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的β-巰基乙醇（β-Mercaptoethanol，β-ME）對延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗中，添加50μM一組在重組胚的卵裂率及囊胚發(fā)育率方面均顯著高于其它濃度組（P<0.05），所以確定50μM是單獨使用β-ME時最適合于延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　3.在延邊黃牛

4、體細胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的乙二胺四乙酸二鈉（EDTA Disodium Salt，EDTA-2Na）對延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗中，添加50μM一組在卵裂率上高于其他三組，但并無統(tǒng)計學差異，在重組胚的囊胚發(fā)育率方面顯著高于其它濃度組（P<0.05），所以確定50μM是單獨使用EDTA-2Na時最適合于延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　4.在延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加

5、不同濃度的檸檬酸鈉（Sodium Citrate）對延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗中，添加0.6mM一組在重組胚的卵裂率及囊胚發(fā)育率方面均顯著高于0mM和0.3mM組（P<0.05），與1.2mM組無統(tǒng)計學差異，綜合分析，確定0.6mM是單獨使用檸檬酸鈉時最適合于延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　5.在延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的維生素 E（Alpha Tocopherol，VE

6、）對延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗中，添加100μM一組在重組胚的卵裂率及囊胚發(fā)育率方面均顯著高于其它濃度組（P<0.05），所以確定100μM是單獨使用VE時最適合于延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　6.在延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）對延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗中，在卵裂

7、率上，7.5μM組和15μM組顯著高于加0μM組（P<0.05），在囊胚發(fā)育率上，15μM組顯著高于0μM組和30μM組（P<0.05），雖然與7.5μM組無統(tǒng)計學差異，但綜合分析，我們認為15μM是單獨使用EGCG時最適合于延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　7.在延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的亞硒酸鈉（Sodium Selenite，SS）對延邊黃牛體細胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗中，2.