1、研究背景：Leber視神經(jīng)萎縮(Leber hereditary optic neuropathy,LHON。OMIM:535000)是一種與線粒體DNA突變相關(guān)的遺傳性疾病。LHON以母系遺傳為特征,多發(fā)于青壯年男性,發(fā)病年齡為1～70歲,平均發(fā)病年齡為27～34歲,常表現(xiàn)為急性或亞急性的雙側(cè)視力喪失,雙眼同時或先后相繼受累,以中心視覺缺失為特征,色覺嚴(yán)重丟失,視野檢查示中心暗點(diǎn)和旁中心暗點(diǎn)。神經(jīng)眼科學(xué)檢查通常顯示視乳頭周圍毛細(xì)血管擴(kuò)

2、張,微血管病,視盤水腫以及血管彎曲,58％的帶有11778位點(diǎn)突變的患者都有這些特征,并在少數(shù)無癥狀的母系親屬成員中發(fā)現(xiàn)此類癥狀。LHON的主要病理特征為視神經(jīng)和視網(wǎng)膜神經(jīng)元的退化,有時伴發(fā)周圍神經(jīng)的退化、心臟傳導(dǎo)阻滯甚至更為嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。自1988年Wallace等首次發(fā)現(xiàn)mtDNA G11778A/ND4位點(diǎn)的點(diǎn)突變是LHON中最常見的原發(fā)性突變后,相繼發(fā)現(xiàn)T14484C/ND6和G3460A/ND1原發(fā)性突變位點(diǎn)的報(bào)道。90

3、%~95%的LHON患者都與G11778A、G3460A、T14484C這3種原發(fā)性突變有關(guān),它們分別位于ND4、ND1和ND6基因,均是編碼呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ亞單位的基因。在大多數(shù)LHON家系中,致病性mtDNA點(diǎn)突變累及母系成員,但并不是所有母系成員都表現(xiàn)LHON癥狀。由此推測,mtDNA突變不是LHON發(fā)病的惟一條件。不完全外顯以及男性多發(fā)的現(xiàn)象表明,其他因素如核基因、線粒體單體群及環(huán)境因素(如吸煙和飲酒等)也可能是LHON的致病因素

4、。迄今,LHON的各種相關(guān)突變的遺傳特性及其發(fā)病機(jī)制仍尚未完全明了。研究目的對浙江地區(qū)Leber視神經(jīng)萎縮疾病患者的線粒體基因組全序列進(jìn)行測序分析,以期探討與LHON發(fā)病相關(guān)的線粒體因素。研究對象兩個家系LHON先證者及其相關(guān)母系親屬和10例正常健康對照。
　　研究方法：(1)抽取患者和正常健康對照的外周血(抗凝),苯酚-氯仿法純化基因組DNA。(2)取兩個LHON家系的先證者及其相關(guān)親屬與10例正常健康對照的DNA樣本,PCR擴(kuò)

5、增其mtDNA全序列,應(yīng)用通用引物M13進(jìn)行正、反向測序。(4)DNAssist軟件及Chromas2軟件進(jìn)行mtDNA數(shù)據(jù)分析,并與Mitomap等人線粒體遺傳學(xué)權(quán)威數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對分析。
　　研究結(jié)果：(1)在兩個LHON家系中均存在mtDNA11778G>A突變。(2)在家系1中,發(fā)現(xiàn)2個一致性突變:3497C>T(Ala→Val)和3571C>T(Leu→Phe),均位于氧化磷酸化復(fù)合體Ⅰ的ND1亞基上;在家系2中,發(fā)現(xiàn)4個

6、一致性突變:10398A>G(Thr→Ala)、14502T>C(Ile→Val)、14766C>T(Thr→Ile)和15326A>G(Thr→Ala);另外,在mtDNA調(diào)控區(qū)發(fā)現(xiàn)家系中的患者及正常個體線粒體基因組中存在3個非功能性SNP位點(diǎn):73A>G、94G>A、263A>G。
　　結(jié)論：(1)mtDNA11778G>A(Arg→His)仍為兩個LHON家系的首要致病因素。(2)家系1的2個一致性突變3497C>T(Ala

7、→Val),3571C>T(Leu→Phe)均位于突變熱點(diǎn)ND1亞基上,可能對LHON的發(fā)病起到協(xié)同作用。其中3571C>T是一個未被報(bào)道過的位點(diǎn),應(yīng)對其進(jìn)行進(jìn)一步研究。(3)家系2有4個一致性突變:10398A>G(Thr→Ala)、14502T>C(Ile→Val)、14766C>T(Thr→Ile)和15326A>G(Thr→Ala)。這些突變位點(diǎn)的共同作用可能使LHON患者細(xì)胞中出現(xiàn)大量的突變型的mtDNA,LHON患者細(xì)胞中線