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![IL-17在川崎病小鼠外周血細(xì)胞中分泌情況的探討.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/19/12/a48e245c-1f2d-4afa-ba75-3b402439a6a4/a48e245c-1f2d-4afa-ba75-3b402439a6a41.gif)
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文檔簡介
1、目的:IL-17是一種細(xì)胞因子新亞型,其與已知的細(xì)胞因子家族不同,它被認(rèn)為是一個(gè)前炎癥因子, IL-17在體內(nèi)可由Th17、NK細(xì)胞、CD+8淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等生成。IL-17和生成IL-17的細(xì)胞在自身免疫性疾病中能夠引起機(jī)體的主動免疫并且在病理損害方面發(fā)揮重要的作用,而川崎病是一種自身免疫性疾病,且其發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚,本研究通過萃取干酪乳桿菌細(xì)胞壁成分腹腔注射BALB/C小鼠,建立川崎病動物模型,使用流式細(xì)胞儀檢測不同時(shí)間點(diǎn)
2、不同淋巴細(xì)胞亞群及中性粒細(xì)胞分泌IL-17的情況,及酶聯(lián)免疫吸附法測量IL-17和INF-γ在血漿中的含量,從而探討IL-17在川崎病急性期的作用。
方法:萃取干酪乳桿菌細(xì)胞壁成分(LCWE),并調(diào)致終濃度為0.8mg/ml,將60只BALB/C小鼠分為對照組10只,實(shí)驗(yàn)組50只,注射LCWE0.7ml,于注射后的第18小時(shí)、3天、5天、10天、28天分別取10只小鼠的外周血,處死并留取心臟組織,送做病理切片HE染色觀察。外周
3、血肝素鈉抗凝后留取血漿成分,酶聯(lián)免疫吸附法測量IL-17和INF-γ含量,血細(xì)胞應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測3天及對照組CD+69在淋巴細(xì)胞中的比例;各實(shí)驗(yàn)分組及對照組CD+4、CD+8亞群在淋巴細(xì)胞中的比例及淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞在外周血中的比例;分泌IL-17和INF-γCD+4、CD+8亞群比例及分泌IL-17的中性粒細(xì)胞的比例;血漿中的IL-17含量及分泌IL-17的CD+4、CD+8亞群比例與分泌INF-γ的CD+4、CD+8亞群比例相關(guān)
4、性,血漿中IL-17與中性粒細(xì)胞及分泌IL-17的中性粒細(xì)胞的相關(guān)性。
結(jié)果:1.病理切片:實(shí)驗(yàn)組小鼠的病理變化主要為心臟血管炎性改變,其中冠狀血管病變嚴(yán)重,12小時(shí)有少量中性粒細(xì)胞浸潤,3天有大量的中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤,以中性粒細(xì)胞為主,5天以淋巴細(xì)胞為主,10天炎性細(xì)胞較前明顯減少,28天浸潤的炎性細(xì)胞基本消失。同時(shí)心內(nèi)膜、心外膜、心肌組織中均有炎性細(xì)胞浸潤,且心肌細(xì)胞腫脹,胞質(zhì)染色嗜酸性增強(qiáng)。對照組小鼠心臟組織無炎癥
5、。2.免疫學(xué)指標(biāo):18小時(shí)實(shí)驗(yàn)組CD+3CD+69/CD+3與對照組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.001,18小時(shí)時(shí)比值上升,最高點(diǎn)(47.47%±2.77%),后下降,在第5天時(shí)下降到最低點(diǎn),又上升逐漸恢復(fù)并超過對照組水平,與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CD+4細(xì)胞在18小時(shí)時(shí)比值最高(66.11%±4.09%),后下降,與對照組比較18小時(shí)、10天、28天有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CD+8細(xì)胞先升高后下降再升高,高峰在5天(16.81%±1.02%
6、),各實(shí)驗(yàn)組與對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中性粒細(xì)胞在5天時(shí)達(dá)高峰(10.32%±1.26%),且3、5、10天組與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-17在其分泌細(xì)胞CD+4、 CD+8、中性粒細(xì)胞的比例均先增加后降低, CD+4是第5天達(dá)高峰(1.54%±0.17%), CD+8而是18小時(shí)時(shí)最高(0.58%±0.16%),中性粒細(xì)胞是3天時(shí)達(dá)高峰(1.46%±0.23%),且除CD+810天、28天外各實(shí)驗(yàn)組與對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。I
7、NF-γ在其分泌細(xì)胞CD+4、 CD+8的比例均先增加后降低, CD+4是第3天達(dá)高峰(0.73%±0.15%), CD+8而是5天時(shí)最高(14.15%±0.79%),CD+4是18小時(shí)、3天組與之比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CD+8是18小時(shí)、3天、5天、10天與對照組比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血漿中IL-17、INF-γ均是先增高,后降低,IL-17是3天時(shí)最高(42.82±5.77Pg/ml),且與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。INF-γ是3天時(shí)最
8、高(105.53±7.22Pg/ml),5天、10天與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)指標(biāo):血漿中IL-17的含量與全血中淋巴細(xì)胞的比值呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,P<0.05,IL-17與分泌IL-17的CD+4亞群比例呈正相關(guān)關(guān)系,P<0.05, IL-17與分泌IL-17的CD+8亞群比例則相反,而成負(fù)相關(guān)關(guān)系,P<0.05,血漿中的IL-17含量及分泌IL-17的CD+4、CD+8亞群比例與分泌INF-γ的CD+4、CD+8亞群比例呈正相關(guān)
9、關(guān)系,且P<0.05。在血漿中IL-17與INF-γ的含量呈正相關(guān)關(guān)系,但P>0.05,還不能說明二者之間存在相關(guān)性。血漿中IL-17的含量與中性粒細(xì)胞在全血中的比例呈正相關(guān)關(guān)系,P<0.05;血漿中IL-17與分泌IL-17中性粒細(xì)胞負(fù)相關(guān)關(guān)系,但P>0.05,還不能說明二者之間有相關(guān)性。
結(jié)論:1.干酪乳桿菌細(xì)胞壁成分(LCWE)腹腔注射能夠誘導(dǎo)BALB/C小鼠冠狀血管損害。其機(jī)制是通過超抗原誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞大量的增值與活化。
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