小麥抗逆相關基因TaBβ-1的克隆及功能驗證.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、小麥是人類主要的糧食作物之一,干旱、鹽漬脅迫等逆境是小麥生產(chǎn)的主要環(huán)境限制因子之一,其嚴重影響小麥的產(chǎn)量和栽培范圍。因此,應用分子生物學和基因工程等技術研究小麥抗逆機制,挖掘利用抗旱、耐鹽基因資源,并通過基因工程培育耐逆小麥品種是解決這個問題的有效途徑之一。
  蛋白磷酸酶2A(PP2A)是由催化亞基C和結構亞基A先形成核心酶,然后再與各種可變的調節(jié)亞基B組成異三聚體復合物-PP2A全酶調節(jié)亞基B主要分為B或PR55家族、B'或P

2、R61/56家族、B"或PR72家族、B'''或PR93/PR110家族,PP2A可以直接參與多種信號途徑的調控。本研究以小麥強抗旱品種旱選10號為試驗材料,利用同源克隆的方法首次克隆到小麥蛋白磷酸酶2A調節(jié)亞基基因,并應用實時定量PCR技術分析其在不同小麥組織中和多種逆境脅迫下的表達特性;進一步通過轉化模式植物擬南芥研究目標基因在逆境脅迫中的功能,同時應用BiFC技術驗證小麥蛋白磷酸酶2A不同亞基間在體內的互作。主要研究結果如下:

3、r>  1、克隆了小麥蛋白磷酸酶2A調節(jié)亞基基因TaBβ-1的兩個全長cDNA序列TaBβ-1-1和TaBβ-1-2,它們編碼相同的蛋白,分子量為57.1kDa,等電點為5.87,含有PP2A調節(jié)亞基的1個CDC55保守結構域,1個alpha/beta結構域,2個PR55保守結構域和6個WD重復子。蛋白比對和聚類分析結果表明,該基因與水稻PP2A調節(jié)亞基(EEE56585)高度同源,同源性達87%。
  2、TaBβ-1基因在小麥

4、孕穗期的根、穗、葉中均有表達,且在不同生育時期的新葉中,苗期葉片的表達量最高。TaBβ-1基因的表達明顯受干旱、NaCl、低溫和ABA誘導,說明其參與對多種非生物脅迫以及外源ABA處理的應答反應,但表達模式不同。
  3、過表達TaBβ-1的轉基因擬南芥在種子萌發(fā)期、幼苗期和成株期都比野生型具有較強的耐干旱、鹽、冷脅迫的能力,說明TaBβ-1基因參與了對干旱等滲透脅迫的響應。在干旱、鹽、低溫脅迫下,轉基因株系的存活率大于野生型和G

5、FP株系,且具有較高的細胞膜穩(wěn)定性(CMS)、脯氨酸含量(Fp)和葉綠素含量(Chl)。
  4、洋蔥鱗莖表皮細胞瞬時表達結果顯示,TaBβ-1定位于細胞膜和細胞核。
  5、小麥蛋白磷酸酶2A調節(jié)亞基TaBβ-1、催化亞基TaPP2Ac-1與結構亞基TaPP2Aa-1在洋蔥表皮細胞的細胞膜和細胞核內均發(fā)生兩兩互作。
  本文的研究結果表明,小麥蛋白磷酸酶2A調節(jié)亞基TaBβ-1在小麥PP2A參與干旱響應和滲透脅迫的信

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