1、腫瘤細胞對多種化療藥物產生的多藥耐藥性MDR(multidrugresistance)是臨床化療失敗的主要原因，MDR的形成機制復雜，目前認為MDRl基因(multidrugresistancegene1)表達異常是導致MDR產生的主要因子。在胰腺癌的臨床診治工作中，探討胰腺癌中MDRl基因的表達及其轉錄調控有重要的研究價值。 臨床研究應用免疫組織化學法和RT-PCR技術分別從蛋白和基因水平檢測MDRl基因在胰腺癌臨床標本中的表

2、達，并研究其與胰腺癌根治性術后生存時間之間的關系。研究結果表明，MDRl基因的蛋白表達產物P-gp在胰腺癌中的表達(陽性率79．3％)明顯高于正常胰腺、癌旁組織和胰腺良性腫瘤；RT-PCR證實同樣的結果；P-gp與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、分化程度、TNM分期以及術前是否行介入化療方面無顯著性差異，但對根治性術后生存時間有一定的影響。 實驗研究通過RT-PCR檢測MDRl基因在兩株胰腺癌細胞株AsPC．1和BxPC-3中的

3、表達，發(fā)現(xiàn)均有較高水平的基礎表達。BxPC-3為原發(fā)癌細胞株，且其MDRl基因表達要略強于在AsPC．1細胞，因此選擇BxPC-3細胞株作為進一步的研究對象。在體外通過逐步增加阿霉素(ADM)濃度篩選，成功構建了胰腺癌多藥耐藥細胞株BxPC-3/ADM，發(fā)現(xiàn)MDRl在誘導早期的耐藥中起主導作用，在后期則和多藥耐藥相關蛋白(MRP)協(xié)同發(fā)揮作用；我們通過脂質體轉染法將MDRlcDNA轉入BxPC-3細胞，成功獲得了短時的MDRl高表達，穩(wěn)

4、定轉染的單克隆表達尚有待進一步的研究。 利用RNA干擾技術，設計合成了針對MDRl基因的siRNA，并在其上下游分別引入BglII和HindlII限制性酶切位點，通過雙酶切連接反應將MDRlsiRNA插入質粒載體RetropSuper多克隆位點中的BglII和HindIII之間，以此構建MDRlsiRNA真核表達質粒Re仃0DSuper-MDRlsiRNA，應用RT-PCR行酶切鑒定，結果顯示MDRlsiRNA成功地載入了質粒。

5、采用脂質體介導的方法將MDRlsiRNA表達質粒轉染胰腺癌細胞株BxPC．3，應用RT-PCR和Westernblot方法檢測BxPC一3細胞中MDRl在基因和蛋白水平的表達變化，研究結果顯示MDRlsiRNA表達質粒能顯著抑制胰腺癌細胞BxPC-3中MDRl基因的表達，MDRl的蛋白表達水平亦受到明顯抑制。 結論：研究結果表明，胰腺癌中MDRl呈高表達，并對根治術后生存時間有一定的影響。胰腺癌細胞株AsPC-1和BxPC-3存