1、蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis，簡(jiǎn)稱Bt)營(yíng)養(yǎng)期殺蟲(chóng)蛋白Vip3A類(lèi)對(duì)夜蛾科害蟲(chóng)具有較高的殺蟲(chóng)活性。雖然Vip3Aa蛋白間的序列相似性很高(95％-100％)，但是，不同Bt菌株來(lái)源的Vip3Aa蛋白的殺蟲(chóng)譜和殺蟲(chóng)活性存在很大差異。本研究為了探索Vip3 Aa11羧基端點(diǎn)突變對(duì)其殺蟲(chóng)活性和敏感性的影響，基于Vip3Aa11和Vip3Aa39蛋白氨基酸序列同源性高而殺蟲(chóng)活性差異大的特點(diǎn)，利用定點(diǎn)突變技術(shù)將挑選

2、的位于Vip3 Aa11羧基端的九個(gè)差異氨基酸分別突變?yōu)閂ip3 Aa39相應(yīng)位點(diǎn)上的氨基酸。得到九個(gè)突變體:S543N、I544L、D547E、T681V、T685I、S686R、R704G、I780L和Y784N。將突變體基因在大腸桿菌(E.coli) BL21菌株中誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE分析結(jié)果表明九個(gè)突變基因和vip3Aa11均在可溶組分中表達(dá)大小約88 kDa的蛋白片段。
　　對(duì)小菜蛾(Plutella xyllos

3、tella)、甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）、棉鈴蟲(chóng)（Helicoverp aarmigera）、小地老虎(Agrotis ipsilon)進(jìn)行生物活性測(cè)定。結(jié)果顯示，突變體以及Vip Aa11蛋白均對(duì)小菜蛾無(wú)明顯殺蟲(chóng)活性。與Vip3Aa11相比，突變體蛋白對(duì)甜菜夜蛾、棉鈴蟲(chóng)和小地老虎三種試蟲(chóng)的殺蟲(chóng)活性均有不同程度的變化。三個(gè)突變體蛋白S543N、I544L和S686R對(duì)甜菜夜蛾活性明顯升高，其活性分別提高了5倍、2.6

4、5倍和8.98倍;而這三個(gè)突變體對(duì)棉鈴蟲(chóng)和小地老虎的殺蟲(chóng)活性均有不同程度的降低;突變體蛋白Y784N對(duì)四種試蟲(chóng)完全喪失了殺蟲(chóng)活性。胰蛋白酶消化結(jié)果顯示，Y784N對(duì)胰蛋白酶極度敏感，被胰蛋白酶全部降解，這可能是其殺蟲(chóng)活性完全喪失的根本原因。而其余八個(gè)有活性的突變體蛋白經(jīng)胰蛋白酶消化后均可形成一個(gè)穩(wěn)定的62 kDa抗性核心多肽。
　　這些結(jié)果表明Vip3 Aa11羧基端543-784區(qū)段部分氨基酸對(duì)其殺蟲(chóng)特異性以及殺蟲(chóng)毒力均具有重要