1、目的：本次研究主要完成了1.對40例健康漢族人群KIR、HLA-Cw位點基因分型，分析并分選出KIR2DL3+/HLA-C1+個體；2.建立HCV體外感染人CD4+T細胞靶細胞模型。本次研究的兩部分內容為KIR2DL3/HLA-C1基因組合與NK細胞體外抑制HCV復制相關性研究的關鍵前提和基礎。
　　方法：⑴取隨機抽取的40例健康漢族人群外周血樣本，采用商用試劑盒嚴格按照說明書進行KIR、HLA-Cw位點的基因分型；采用直接計數法

2、對分型結果進行綜合分析。⑵采用脂質體轉染法進行HCVRNA對Huh-7.5細胞的轉染，RT-PCR檢測轉染后細胞內HCVRNA復制情況；Western blot檢測轉染后細胞內HCV NS3、NS5A蛋白的表達情況；免疫熒光法檢測轉染后細胞內NS5A蛋白的細胞定位。檢測成功后，收集產生自上述HCV Huh-7.5細胞體外培養(yǎng)系統(tǒng)的HCV病毒顆粒，與分離自抗HCV陰性個體的CD4+T細胞共同孵育，RT-PCR檢測共孵育后CD4+T細胞內H

3、CVRNA復制情況；Western blot檢測共孵育后CD4+T細胞內HCV NS3、NS5A蛋白的表達情況。
　　結果：①40例樣本中HLA-Cw位點HLA-C1基因出現頻率較HLA-C2高，且HLA-C1C1出現的頻率較HLA-C1C2高；KIR基因型中，以3DL1、2DL1、2DL3、2DL4、3DL2、3DL3、2DP1、3DP1、2DS4出現頻率較高，而3DS1、2DS1、2DS2、2DS3、2DS5、2DL2、2DL

4、5出現頻率較低；KIR2DL3+/HLA-C1C1例數較KIR2DL2+/HLA-C1C1多。以上可見，KIR2DL3+/HLA-C1+基因型組合以KIR2DL3-2DL3/HLA-C1C1者較多，占總樣本數52.5％。②在HCV Huh-7.5細胞體外培養(yǎng)系統(tǒng)的構建中，RT-PCR檢測到轉染后Huh-7.5細胞內HCVRNA的復制；Western blot檢測轉染后Huh-7.5細胞內HCV NS3及NS5A蛋白的表達；免疫熒光法對轉

5、染后細胞內HCV NS5A蛋白成功進行了定位。產生自HCV Huh-7.5細胞體外培養(yǎng)系統(tǒng)的HCV病毒顆粒與CD4+T細胞共同孵育，RT-PCR及Western blot技術分別檢測到共孵育后CD4+T細胞內HCVRNA的復制及HCV NS3及NS5A蛋白的表達。
　　結論：⑴根據KIR、HLA-Cw分型結果進行分析，我們得到KIR2D L3+/HLA-C1+(KIR2DL3-2DL3/HLA-C1C1、KIR2DL3-2DL2/