1、　　本課題的一部分工作是探討SARS-CoVN蛋白可能的生物學(xué)功能，具體研究如下：1)構(gòu)建帶myc標(biāo)簽和HA標(biāo)簽的N蛋白真核表達載體，利用免疫熒光染色和N蛋白的pEGFP表達載體檢測初步確定N蛋白定位在細(xì)胞漿。2)通過免疫沉淀發(fā)現(xiàn)293細(xì)胞內(nèi)一分子量大約90KDa的未知蛋白與N蛋白有相互作用。3)通過免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)SARS-CoVN蛋白與其RNA聚合酶有相互作用，且推測一個聚合酶分子有可能和多個N蛋白分子作用。4)利用N蛋白磷酸化抗體檢

2、測發(fā)現(xiàn)N蛋白存在絲氨酸位點的磷酸化修飾，并初步證實N蛋白可以抑制ERK/MAPK通路和PI3K/Akt通路及激活凋亡信號分子。5)最后，我們用N蛋白特異性抗體驗證了該實驗所用真核載體表達的N蛋白是特異的SARS-CoV核衣殼蛋白，證明了上述實驗結(jié)果是有意義的。該課題旨在尋找N蛋白與病毒致病性的關(guān)系以及SARS病毒的致病機理，對有效地預(yù)防、診斷和治療SARS具有重要的意義。　　RNA干擾(RNAi)是一種由雙鏈RNA(dsRNA)誘發(fā)的

3、序列特異性轉(zhuǎn)錄后基因沉默。由于RNAi技術(shù)具有高效、專一、用量少、毒性小的特點，因此近年來已經(jīng)作為一種抑制基因表達的工具被廣泛的應(yīng)用?！　”菊n題的另一部分工作是設(shè)計并構(gòu)建了針對SARS-CoVN蛋白的特異性siRNA表達質(zhì)粒，并在細(xì)胞水平上證實了siRNA對N蛋白的表達存在干擾效應(yīng)及干擾的劑量效應(yīng)。該工作為SARS冠狀病毒N蛋白的功能研究奠定了基礎(chǔ)，為研究N蛋白和SARS-CoV致病性的關(guān)系提供了新的平臺，為預(yù)防、治療SARS提供了新