1、嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(SARS),亦稱(chēng)傳染性非典型肺炎.是于2002年1月中旬在中國(guó)華南地區(qū)首先出現(xiàn)的一種新型的呼吸系統(tǒng)綜合癥.隨后,SARS在中國(guó)內(nèi)地和香港、加拿大、新加坡、越南等地呈現(xiàn)暴發(fā)行流行的趨勢(shì).SARS的病源已被確認(rèn)為一種新型冠狀病毒(或冠狀病毒變異株),即SARS冠狀病毒(SRAS-CoV),在短短一個(gè)月間,十余株不同SRAS-CoV的全基因序列已登錄美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)的GeneBank.在已知類(lèi)似冠狀病

2、毒開(kāi)放閱讀框分析的基礎(chǔ)上,對(duì)SARS-CoV初步的基因組注釋已經(jīng)完成,根據(jù)其基因編碼,預(yù)測(cè)得到的主要蛋白質(zhì)有RNA聚合酶蛋白、刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、核衣殼蛋白(簡(jiǎn)稱(chēng)核蛋白,N)、膜蛋白(M)等.以往對(duì)動(dòng)物冠狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白的研究發(fā)現(xiàn),冠狀病毒的N蛋白在病毒復(fù)制和產(chǎn)生的病理反應(yīng)中起重要作用.該研究擬用重組SARS冠狀病毒N蛋白建立間接ELISA,檢測(cè)SARS患者血清標(biāo)本中抗SARS冠狀病毒N蛋白的抗體IgM、IgG.了解SARS冠

3、狀病毒N蛋白在人體內(nèi)的免疫原性.旨在闡明SARS冠狀病毒感染機(jī)體免疫應(yīng)答的機(jī)制,為研究SARS冠狀病毒感染的機(jī)制和有效的診斷試劑及亞單位疫苗提供依據(jù).在研究中,首先通過(guò)RT-PCR特異性擴(kuò)增編碼N蛋白基因,然后克隆至原核表達(dá)載體pET32a+,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)獲得了高效表達(dá)的分子量約為66KD的重組蛋白包涵體,且能與SARS病人血清發(fā)生特異性反應(yīng).利用切膠純化的重組蛋白,該研究又對(duì)其應(yīng)用進(jìn)行了初步探