膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子重組腺病毒載體的構建及鑒定.pdf_第1頁
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1、Y784005中圖分類號：Q784瀘糾壓學院研究生碩士學位論文膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子重組腺病毒載體的構建及鑒定二oO五年五月光度法測定A260／A280為19?？俁NA未明顯降解。2以提取的總RNA為模板，GDNF的特異性上、下游引物做RTPCR后，瓊脂糖凝膠電泳得約650bp的片段，測序分析結果顯示為GDNFcDNA片段。3成功制備感受態(tài)大腸桿菌DH5Ⅱ后，限制性內切酶HindIII、KpnI雙酶切pAdTraekCMV及，GDNF

2、cDNA，T4DNA連接酶連接酶切產物，將連接產物轉入大腸桿菌DH5Q，接種到含有卡那霉素的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，生長良好，見大量菌斑。4將于卡那霉素陽性培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌DH5Q提取質粒，以提取的質粒為模板，GDNF的特異性上、下游引物做PCR擴增后，瓊脂糖凝膠電泳得約650bp的片段。限制性內切酶Hin棚I、XpnI酶切提取的質粒后，瓊脂糖凝膠電泳得約650bp的片段和9200bp的片段。測序分析結果顯示GDNFcDNA插入方向正確

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