1、目的:研究人類MM細(xì)胞系和MM患者BMSCs之間相互作用對VEGF和IL-6分泌的調(diào)控作用,分析VEGF和IL-6的相互作用在MM發(fā)病機制中的意義.方法:取14例MM患者和4例正常捐獻者的骨髓,Ficoll-Hypaque密度梯度離心法分離出單個核細(xì)胞,接種于含20％胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基中,培養(yǎng)得到MM-BMSCs和正常人-BMSCs(N-BMSCs),應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定其表型;在進行下面的實驗前,BMSCs饑餓24小時(1％胎牛血

2、清),以下實驗均在少血清狀態(tài)(1％胎牛血清)中進行;用ELISA方法檢測體外培養(yǎng)的MM-BMSCs、N-BMSCs以及人類MM細(xì)胞系U266上清液中VEGF、IL-6的濃度;分別用重組人VEGF、IL-6刺激BMSCs,培養(yǎng)72小時,收集上清液,測定IL-6、VEGF的濃度,用抗VEGF單克隆抗體進行抑制實驗;在BMSCs中分別加入抗VEGF單克隆抗體、抗IL-6單克隆抗體,培養(yǎng)72小時后收集上清液,檢測IL-6、VEGF的濃度;用重組

3、人IL-6刺激人類MM細(xì)胞系U266,培養(yǎng)72小時,收集上清液,測定VEGF的水平,用抗IL-6單克隆抗體進行抑制實驗;在U266與BMSCs共同培養(yǎng)體系中分別加入抗VEGF單克隆抗體、抗IL-6單克隆抗體,培養(yǎng)72小時后收集上清液,檢測IL-6和VEGF濃度.未加細(xì)胞因子的單獨培養(yǎng)于含1％胎牛血清的培養(yǎng)基中的U266細(xì)胞或BMSCs上清液中IL-6或VEGF的濃度作為對照.結(jié)論:在MM中,骨髓瘤細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞之間的相互作用調(diào)節(jié)VE