1、豬輪狀病毒(Porcine rotavirus，PRV)屬呼腸病毒科，輪狀病毒屬。豬輪狀病毒是引起仔豬病毒性腹瀉常見(jiàn)的病原之一，主要臨床癥狀表現(xiàn)為黃色水樣腹瀉并伴隨著嘔吐。因該病流行范圍廣，發(fā)病率高，常與其他疾病混合感染而使病情加重，導(dǎo)致高死亡率，給畜牧業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。
　　輪狀病毒血清群和血清型眾多，且不同毒株的生物學(xué)特性不同，故對(duì)輪狀病毒的分離鑒定及相關(guān)特性的研究，無(wú)論是對(duì)該病毒的基礎(chǔ)性研究亦或是對(duì)該病的應(yīng)用性研究均具有十

2、分重要的意義。
　　本研究對(duì)2012年從河北某發(fā)病豬場(chǎng)采集的仔豬腹瀉病料進(jìn)行了輪狀病毒的分離鑒定。首先對(duì)疑似病料，進(jìn)行了PRV VP6部分基因的PCR檢測(cè)，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序證明，獲得的275bp的PRV VP6部分基因序列，同時(shí)對(duì)TGEV和PEDV進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增，未見(jiàn)針對(duì)這兩種病毒的特異條帶。結(jié)果表明該病料中含有輪狀病毒。將PRV PCR檢測(cè)陽(yáng)性糞便10倍稀釋，經(jīng)病毒釋放和無(wú)菌處理后，分別接種于豬小腸上皮細(xì)胞IEC-2、恒河

3、猴胎腎細(xì)胞MA-104和Marc-145，經(jīng)過(guò)一定代次的盲傳，在以上三種細(xì)胞基質(zhì)中均可觀察到細(xì)胞膜融合，細(xì)胞核固縮、空泡化，細(xì)胞脫落等細(xì)胞病變(CPE)，且隨著傳代次數(shù)的增加，CPE也越發(fā)明顯;對(duì)該輪狀病毒地方流行株的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行電鏡觀察，可觀察到典型的車輪狀病毒結(jié)構(gòu)，病毒呈雙層衣殼，直徑大小約70～80nm;免疫電鏡檢測(cè)，可見(jiàn)有大量的典型的輪狀病毒粒子聚集在一起;病毒感染MA-104細(xì)胞后不同時(shí)間超薄切片電鏡觀察顯示，病毒接種30h

4、在胞質(zhì)中可見(jiàn)典型的病毒粒子，60h時(shí)病毒明顯增多，90h后細(xì)胞失去固有形態(tài);間接免疫熒光檢測(cè)表明，接種該輪狀病毒分離株的IEC-2細(xì)胞、MA-104細(xì)胞和Marc-145細(xì)胞中均有特異性免疫熒光出現(xiàn);病毒中和實(shí)驗(yàn)表明，分離病毒所致病變，可被特異性豬輪狀病毒抗血清所抑制。為進(jìn)一步純化該病毒，將病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物與氯仿連續(xù)作用5代后在MA-104細(xì)胞上擴(kuò)大培養(yǎng)，利用雙層瓊脂法進(jìn)行蝕斑試驗(yàn)，通過(guò)多次挑取蝕斑在細(xì)胞上培養(yǎng)，達(dá)到了病毒的純化。<

5、br>　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)所分離的毒株進(jìn)行了部分理化特性的測(cè)定。測(cè)定結(jié)果表明，該輪狀病毒地方流行分離株對(duì)脂溶性試劑表現(xiàn)出極度不敏感，pH3.0處理病毒1h后其感染能力略微下降，經(jīng)50℃水浴處理30min后，感染能力明顯下降。
　　將分離毒細(xì)胞培養(yǎng)物灌服新生仔豬后，30h開(kāi)始輕微腹瀉，70h后出現(xiàn)嘔吐和水樣腹瀉，感染后96h死亡。剖檢腸壁變薄，松弛胃內(nèi)充滿凝乳塊，對(duì)所收集的糞便樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)和免疫熒光檢測(cè)，均為陽(yáng)性，表明所分離的病毒對(duì)豬