1、背景：心肌梗塞和心源性猝死在一天內(nèi)有明顯的好發(fā)時(shí)段，尤在凌晨高發(fā)。交感神經(jīng)活動(dòng)及腎上腺兒茶酚胺的分泌也存在晝夜節(jié)律，并且其高峰與心梗的高發(fā)時(shí)間一致。因此交感神經(jīng)活動(dòng)加強(qiáng)及血中兒茶酚胺水平增高是心梗的誘發(fā)因素之一。β腎上腺素受體(β-AR)可介導(dǎo)交感神經(jīng)—兒茶酚胺的作用，其中β3-AR的功能是目前的研究熱點(diǎn)之一。但β3-AR在心臟的表達(dá)節(jié)律及其調(diào)控機(jī)制、心梗后心臟β3-AR發(fā)生何種變化，以及這種變化與心梗預(yù)后有何關(guān)系，目前仍不清楚。本研究

2、的目的之一是研究β3-AR在心梗后的表達(dá)和功能的晝夜節(jié)律改變。GHRP-6是一種人工合成的生長(zhǎng)素釋放肽，可通過(guò)生長(zhǎng)素促泌素受體(GHS-R)影響攝食、睡眠和發(fā)揮心血管保護(hù)作用。由于生物鐘中樞視交叉上核(SCN)存在GHS-R，我們推測(cè)GHRP-6可能對(duì)生物節(jié)律(如運(yùn)動(dòng)和心臟節(jié)律)有明顯影響。本研究的目的之二是驗(yàn)證這一設(shè)想。 方法：1．β3-AR研究部分：利用大鼠在體結(jié)扎冠脈心梗模型、Real-Time RT-PCR、Wester

3、n blot、免疫組化、Langendorff離體心臟灌流等方法，研究急性(24小時(shí)內(nèi))和陳舊性(慢性，心梗14天)心梗時(shí)心肌β3-AR的晝夜節(jié)律變化以及相應(yīng)的心功能改變。2．GHRP-6與生物節(jié)律部分：利用E-Mitter在體心率監(jiān)測(cè)及轉(zhuǎn)輪運(yùn)動(dòng)行為節(jié)律監(jiān)測(cè)等方法研究GHRP-6對(duì)大鼠心率和C57BL/6小鼠轉(zhuǎn)輪運(yùn)動(dòng)日節(jié)律的影響，以及檢測(cè)可能參與GHRP影響生物節(jié)律的關(guān)鍵蛋白的表達(dá)改變。 結(jié)果：1．β3-AR研究部分：(1)正常

4、大鼠心肌β3-AR的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的晝高夜低的日節(jié)律：在mRNA水平，白天的最高值可達(dá)夜晚最低值的18倍之多；在蛋白質(zhì)水平，白天的最高值也是夜晚最低值的2.7倍。(2)在急性和慢性心梗模型中，β3-AR表達(dá)的晝夜節(jié)律均嚴(yán)重減弱，有的甚至完全消失。而一些核心鐘基因(bmal1，npas2)的表達(dá)節(jié)律卻明顯增強(qiáng)。(3)在β3-AR被激動(dòng)后，正常大鼠心率、心肌收縮力在白天(ZT6)的變化十分明顯，心率增加為原來(lái)的2.7倍，收縮力降低至原來(lái)的33

5、.5％；而夜間(ZTl8)變化不明顯。在急性和慢性心梗模型中，白天和夜間的心率和張力相比無(wú)顯著差異。 2．GHRP-6與生物節(jié)律部分：(1)大鼠是晝伏夜出動(dòng)物，正常時(shí)夜間的心率較白天快。GHRP-6(100μg/kg)可使大鼠夜間心率顯著降低，而對(duì)白天的心率影響不大，因而GHRP-6可減弱大鼠心率日節(jié)律。(2)GHRP-6(100μg/kg)使C57BL/6小鼠轉(zhuǎn)輪日節(jié)律(睡眠-覺醒日周期)明顯延長(zhǎng)達(dá)41分鐘，運(yùn)動(dòng)周期向后漂移，

6、并降低運(yùn)動(dòng)活性。(3)GHRP在夜晚(ZT12)給藥可使C57BL/6小鼠SCN的Prokineticin 2(PK2)節(jié)律蛋白表達(dá)增高，這可能與GHRP抑制轉(zhuǎn)輪日節(jié)律有關(guān)。 結(jié)論：1．正常大鼠心肌β3-AR的表達(dá)和功能呈現(xiàn)晝高夜低的24小時(shí)節(jié)律，急性和慢性心梗時(shí)，心肌β3-AR的節(jié)律表達(dá)均鈍化甚至消失。2．大鼠急性和慢性心梗后，鐘基因Npas2和Bmall表達(dá)的晝夜節(jié)律振蕩幅度加大，這與β3-AR的節(jié)律改變方向相反，提示心臟鐘