1、【研究背景及目的】
　　在各種病因所導(dǎo)致的肝損傷中,機體免疫介導(dǎo)所致肝細胞損傷占有重要的地位,盡管具體機制復(fù)雜,但免疫細胞的活化均是其始動因素。本研究室的前期數(shù)據(jù)首次闡述了NK細胞在病毒誘導(dǎo)的重度肝細胞損傷中至關(guān)重要。通過對比研究重型乙型肝炎和輕中度慢性乙型肝炎患者的基因表達譜,發(fā)現(xiàn)鉀離子通道相關(guān)基因KCTD9的表達與疾病的嚴重程度即肝損傷的程度高度正相關(guān),在重型肝炎患者淋巴細胞胞核中該分子高度表達。進一步發(fā)現(xiàn)其表達主要在重型肝炎

2、患者肝組織和外周血NK細胞。初步體外實驗結(jié)果的顯示,該分子的高表達與NK細胞的活化和功能具有緊密聯(lián)系[1-3]。通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),該分子與新型接頭蛋白SHB分子具有緊密功能關(guān)聯(lián),而SHB分子與IL-2受體信號途徑和PI3K途徑相關(guān)[4]。據(jù)此我們提出KCTD9分子可能是NK免疫細胞活化過程中的關(guān)鍵分子之一,并可能通過SHB蛋白參與免疫細胞活化過程。本研究針對KCTD9和SHB基因構(gòu)建相對應(yīng)的標簽質(zhì)粒,通過體外實驗驗證KCTD9分子

3、和SHB分子之間是否存在功能關(guān)聯(lián),為進一步揭示NK細胞及其表達的KCTD9分子在重型乙型肝炎肝損傷發(fā)生和發(fā)展中的作用及其作用機制奠定基礎(chǔ)。
　　【研究方法】
　　利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建在氨基端含有His標記的His-KCTD9融合蛋白載體pHis-KCTD9和在氨基端含有FLAG標記的FLAG-SHB融合蛋白載體pFLAG-SHB,采用HEK293T細胞、jurkat細胞及NK92細胞共轉(zhuǎn)染和免疫共沉淀法驗證KCTD9與SHB

4、分子的相互作用。
　　【研究結(jié)果】
　　成功構(gòu)建了氨基端含有His標記的His-KCTD9融合蛋白載體pHis-KCTD9和在氨基端含有FLAG標記的融合蛋白FLAG-SHB的載體pFLAG-SHB。成功共轉(zhuǎn)染HEK293T細胞、jurkat細胞及NK92細胞后,采用免疫共沉淀法發(fā)現(xiàn)KCTD9與SHB分子無結(jié)合。
　　【研究結(jié)論】
　　成功構(gòu)建了pHIS-hKCTD9和pFLAG-hSHB真核表達質(zhì)粒,通過體外實