1、目的： 本實驗旨在通過建立大鼠全肝缺血再灌注損傷模型，測定肝臟缺血再灌注后血清中內毒素水平、細胞因子TNF-a、IL-6、IL-10水平、肝組織MPO水平及觀察肝臟組織病理改變，從而探討肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生機制及牛腸堿性磷酸酶的保護作用機制。 方法： 將SD大鼠72只隨機分為3組：(1)假手術組(S組)：n=24，大鼠只接受麻醉，開腹，游離肝周韌帶，不阻斷肝臟供血，分別于手術后1、3、6、12h收集血液及肝組織

2、標本，每個時間點n=6；(2)生理鹽水對照組(N組)：依Pringle's法建立肝臟缺血再灌注模型，阻斷入肝血流20min，在再灌注前5min從尾靜脈注射生理鹽水1ml，收集標本時間點及各時間點動物數(shù)同S組；(3)牛腸堿性磷酸酶實驗組(C組)：阻斷入肝血流20min，在再灌注前5min從尾靜脈注射牛腸堿性磷酸酶0.5u/g，其余同N組。于再灌注后1、3、6、12h各時間點再次入腹，經(jīng)門靜脈取血4ml，離心(4℃，3000r/min)10

3、min后，取上清置于-80℃冰箱保存待測。接觸血液標本的器皿均為一次性無熱源器皿。取肝左葉用10％福爾馬林固定，石蠟包埋待用，肝右葉快速置于液氮中保存待測。采用鱟試劑終點顯色法檢測血清內毒素水平；酶聯(lián)免疫吸附實驗法檢測血清TNF-a、IL-6、IL-10水平；髓過氧化物酶法檢測肝組織中性粒細胞浸潤程度；HE染色法觀察肝組織病理改變。 結果： (1)血清內毒素的水平變化：再灌注后S組血清內毒素水平在各時間點無顯著變化(P>

4、0.05)，N組及C組內毒素水平在再灌注后較S組明顯升高，3h達高峰，在同一時間點C組血清內毒素水平顯著低于N組(P<0.05)。(2)血清細胞因子的水平變化：再灌注后S組血清TNF-a、IL-6、IL-10水平變化在各時間點無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，N組及C組TNF-a、IL-6水平均較S組顯著升高(P<0.05)，TNF-a水平高峰出現(xiàn)在再灌注后3h，IL-6水平高峰出現(xiàn)在再灌注后6h，到再灌注12h，TNF-a、IL-6水平仍

5、高于S組，在同一時間點C組TNF-a、IL-6水平顯著低于N組(P<0.05)，N組IL-10水平在再灌注1h稍有升高，到再灌注6h達高峰后迅速下降，再灌注12h，N組IL-10水平與S組沒有顯著性差異(P>0.05)，C組各時間點IL-10水平升高較N組明顯，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)肝組織MPO的水平變化：再灌注后S組肝組織MPO值各時間點無顯著變化(P>0.05)，N組和C組肝組織MPO值再灌注后明顯升高，6h達到最

6、高，顯著高于S組(P<0.05)，在同一時間點C組MPO值顯著低于N組(P<0.05)。(4)肝組織病理學改變：S組肝小葉結構完整，肝細胞排列整齊，未見明顯壞死和中性粒細胞浸潤；N組肝細胞排列紊亂，肝小葉結構不完整，部分肝細胞索、肝竇分界不清，肝竇內見較多紅細胞淤積，肝細胞明顯水腫、脂肪變性，胞漿疏松化，呈氣球樣變性，可見核固縮及凋亡小體，炎癥細胞浸潤較多；C組肝細胞損傷較N組減輕，肝組織結構破壞較輕，肝小葉結構清晰，肝竇間隙見少量紅細