1、目的:檢測廣東地區(qū)女性非小細(xì)胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)患者和鼻咽癌患者中表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)基因的突變和EGFR蛋白表達(dá)，探討肺癌組織中EGFR基因突變與EGFR蛋白表達(dá)及其與腫瘤臨床病理變化的關(guān)系；建立一種快速、可靠的檢測EGFR基因突變的新方法。 材料和方法:收集中山大學(xué)腫瘤防治中心2002年6月至2005年4月病理

2、診斷為NSCLC的71例女性患者肺癌石蠟組織，收集2001年11月1日至2003年1月31日間的58例鼻咽癌石蠟組織，并收集這些病人的臨床病理資料。分別用熒光定量PCR(FQ-PCR)和直接測序法檢測肺癌和鼻咽癌組織中EGFR基因18、19、21號外顯子上的特定突變；用免疫組化技術(shù)檢測肺癌組織EGFR蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:1.熒光定量PCR檢測肺癌組織及鼻咽癌組織中EGFR基因的突變 71例女性非小細(xì)胞肺癌組織中，21例(

3、29.6％)檢測出EGFR基因酪氨酸激酶域存在體細(xì)胞突變，包括9例(42.9％)19號外顯子缺失突變，12例(57.1％)21號外顯子堿基置換突變。9例19號外顯子缺失突變包括15個堿基缺失6例，18個堿基缺失3例。本組病例未檢出18號外顯子2155位點和21號外顯子2582位點堿基置換突變、19號外顯子12個堿基的缺失突變。在58例鼻咽癌患者中未檢測到EGFR基因的突變。 2.直接測序檢測肺癌組織EGFR基因的突變 2

4、1例熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變的肺癌組織中，直接測序檢測出其中20例存在EGFR基因突變，1例未能檢測出EGFR基因突變。分析FQ-PCR和直接測序基因突變類型，兩者結(jié)果完全一致。隨機(jī)選取35例FQ-PCR檢測結(jié)果是陰性的肺癌組織，進(jìn)行直接測序，所有病例均未發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變。3.肺癌組織中EGFR基因的突變、EGFR蛋白表達(dá)與腫瘤臨床病理變化的關(guān)系 (1)肺癌組織中EGFR基因的突變與臨床病理特征的關(guān)系

5、本組21例NSCLC患者腫瘤組織中的EGFR基因突變中，9例患者為腺癌，7例為腺鱗癌，5例為支氣管肺泡癌；10例吸煙者肺癌組織均未檢測出EGFR基因突變。腺癌(9/29，31.0％)、腺鱗癌(7/14，50％)和細(xì)支氣管肺泡癌(5/9，55.6％)的突變率均高于鱗癌(0/19，0.0％)的突變率(P＜0.05)，而腺癌、腺鱗癌以及細(xì)支氣管肺泡癌之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；非吸煙組的EGFR突變率(21/61，34.4％)與吸

6、煙組(0/10，0.0％)有顯著差異(P=0.028)。 分析EGFR的突變與腫瘤臨床病理變化的關(guān)系，TNM-Ⅰ+Ⅱ期腫瘤組織EGFR的突變率是29.8％(14/47)，與TNM-Ⅲ+Ⅳ期組29.2％(7/24)無顯著差異(P＞0.05)；高分化組(Ⅰ-Ⅱ級)EGFR的突變率32.7％(16/49)與低分化組(Ⅲ級)突變率22.7％(5/22)無顯著差異(P＞0.05)；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組EGFR的突變率33.3％(12/36)與發(fā)

7、生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組突變率25.7％(9/35)無顯著差異(P＞0.05)。這些結(jié)果提示EGFR基因突變與NSCLC腫瘤臨床病理變化沒有關(guān)系。 (2)肺癌組織中EGFR基因的突變與EGFR蛋白的表達(dá)之間的關(guān)系 本組肺癌組織EGFR陽性表達(dá)率是66.2％(47/71)。EGFR蛋白在各組織類型NSCLC組織表達(dá)率分別為鱗癌63.2％(12/19)，腺鱗癌50％(7/14)，腺癌75.9％(22/29)，細(xì)支氣管肺泡癌66.7％(

8、6/9)，各組表達(dá)率無顯著性差異(P＞0.05)；EGFR表達(dá)率在吸煙組患者40％(4/10)和不吸煙組患者70.5％(43/61)無顯著差異(P＞0.05)。 TNM-Ⅰ+Ⅱ期腫瘤組EGFR陽性表達(dá)率68.1％(32/47)與TNM-Ⅲ+Ⅳ期組EGFR蛋白陽性表達(dá)率62.5％(15/24)無顯著差異(P＞0.05)；高分化組(Ⅰ-Ⅱ級)表達(dá)率67.3％(33/49)與低分化組(Ⅲ級)表達(dá)率63.6％(14/22)無顯著差異(P

9、＞0.05)；EGFR表達(dá)陽性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組71.4％(25/35)和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組61.1％(22/36)無顯著性差異(P＞0.05)。上述結(jié)果提示NSCLC腫瘤組織EGFR的表達(dá)與臨床病理變化無相關(guān)性。 存在EGFR突變的肺癌組織中EGFR的表達(dá)陽性率是76.2％(16/21)，沒有突變的肺癌組織中EGFR的表達(dá)陽性率是62.0％(31/50)(P＞0.05)。提示肺癌組織中EGFR基因的突變與EGFR蛋白表達(dá)之間無相關(guān)

10、性。 結(jié)論:1.本組女性非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因的突變率是29.6％。EGFR基因的突變與患者是否吸煙、腫瘤的病理類型相關(guān)，而與患者的臨床分期、腫瘤的分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否均無相關(guān)性。 2.本組肺癌組織EGFR蛋白的表達(dá)率是66.2％。EGFR的表達(dá)與患者是否吸煙、腫瘤組織的病理類型、分化級別、臨床TNM分期及有無淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移等因素均無相關(guān)性，EGFR基因突變與蛋白表達(dá)亦無相關(guān)性。 3.在鼻咽癌患者中未檢