1、目前，關(guān)于慢性炎癥與腫瘤之間的關(guān)系已達成比較一致的認識，慢性炎癥不僅作為一些腫瘤發(fā)生的土壤，而且在與腫瘤共同存在時，它還會作為一種促進腫瘤發(fā)展的因素。慢性炎癥與腫瘤相關(guān)炎癥有許多相似之處，如固有免疫細胞的浸潤、基質(zhì)金屬蛋白酶活性升高、血管生成和微血管密度提高，從而，依賴腫瘤浸潤性T細胞或內(nèi)皮淋巴細胞細胞毒性的免疫系統(tǒng)監(jiān)督功能增強，是早期抑制腫瘤發(fā)展的關(guān)鍵。炎癥反應(yīng)過程如血管生成和巨噬細胞、中性粒細胞的浸潤是細菌感染的有效防御機制，但是這

2、個調(diào)節(jié)通路似乎對于腫瘤的預(yù)防并不合適，反而為腫瘤提供了一個保護性環(huán)境，其中細胞因子的表達不僅能幫助組織重建和血管生成，還能保護腫瘤免于免疫系統(tǒng)的抵抗。因此，慢性炎癥在與腫瘤共存環(huán)境中對其產(chǎn)生的作用，與炎癥部位細胞因子的釋放密切相關(guān)。本研究在實驗室前期建立慢性炎癥黑色素瘤復(fù)合動物模型的基礎(chǔ)上，對小鼠血清中部分腫瘤發(fā)展相關(guān)細胞因子的含量進行了檢測，結(jié)合對腫瘤組織中微血管的計數(shù)，分析白細胞介素(IL)-6、IL-17、IL-23、血管內(nèi)皮生長

3、因子(VEGF)與腫瘤組織中微血管密度(MVD)的相關(guān)性，并選取炎癥因子IL-23進行體外實驗，觀察其對B16F10細胞增殖、遷移、侵襲以及血管生成擬態(tài)能力的影響，主要研究內(nèi)容如下:
　　 第一部分:小鼠血清中部分腫瘤發(fā)展相關(guān)細胞因子含量的檢測與分析
　　 本部分研究選取小鼠血清（取自實驗室前期建立的慢性炎癥-黑色素瘤復(fù)合動物模型）作為檢測對象，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對其中部分細胞因子進行檢測與分析，結(jié)合前期

4、實驗中對腫瘤組織進行的微血管計數(shù)進行了相關(guān)性分析。
　　 得出結(jié)果如下:炎癥腫瘤組小鼠血清白細胞介素（IL）-6、IL-17、IL-23、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)均明顯大于單純腫瘤組(P＜0.05)。炎癥腫瘤組小鼠血清中IL-6、IL-17、IL-23、VEGF水平均與MVD呈正相關(guān)(P＜0.05或P＜0.01)。且炎癥腫瘤組組小鼠血清中IL-17、IL-23水平與VEGF呈正相關(guān)(P＜0.01)，IL-6與VEGF無相

5、關(guān)性(P＞0.05)。
　　 根據(jù)以上實驗結(jié)果，結(jié)合關(guān)于上述三種白介素類炎癥因子與腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究現(xiàn)狀。目前達成的共識為:IL-23可以通過增強機體免疫功能產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α等發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng);IL-23通過調(diào)節(jié)免疫監(jiān)視等功能，對腫瘤微環(huán)境中的免疫系統(tǒng)進行編輯，打破機體平衡狀態(tài)，起到誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生的作用。而關(guān)于IL-23與腫瘤血管生成方面的研究關(guān)注度相對不夠，因此，本研究選取IL-23作為下一步體外實驗的研究對象。

6、r>　　 第二部分:IL-23對小鼠黑色素瘤細胞體外增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響
　　 為了進一步觀察單一炎癥因子對腫瘤細胞增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響，本部分選擇IL-23和小鼠來源的黑色素瘤B16F10細胞進行體外實驗研究，通過培養(yǎng)腫瘤細胞，施加IL-23進行作用，觀察其對B16F10細胞增殖、遷移、侵襲及管道形成能力產(chǎn)生的影響。
　　 四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法實驗結(jié)果表明:IL-23干預(yù)

7、組腫瘤細胞增殖率高于對照組，OD值差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明IL-23可促進小鼠黑色素瘤B16F10細胞的生長。且給予IL-23處理時，黑色素瘤細胞伸出細長的偽足，表現(xiàn)出與對照組不同的形態(tài)。
　　 劃痕實驗顯示，加入不同濃度IL-23后，小鼠黑色素瘤B16F10細胞向劃痕中央遷移的距離明顯大于正常對照組(P＜0.05)。
　　 Transwell實驗結(jié)果顯示，加入IL-23組的小鼠黑色素瘤B16F10細胞穿

8、膜數(shù)明顯多于正常對照組(P＜0.05)。
　　 明膠酶譜實驗結(jié)果顯示，加入IL-23后小鼠黑色素瘤B16F10細胞基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9表達活性增強（P＜0.05）。
　　 三維管道形成實驗結(jié)果顯示，加入IL-23后小鼠黑色素瘤B16F10細胞形成管道能力明顯增強。
　　 Western blot結(jié)果顯示加入IL-23后小鼠黑色素瘤B16F10細胞的NF-κB表達增強(P＜0.05);
　　

9、 綜上所述，本研究通過酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實驗，對動物模型中小鼠血清細胞因子進行檢測和分析，尋找細胞因子濃度與腫瘤微血管密度之間的關(guān)聯(lián)性，并選擇炎癥因子白細胞介素-23進行體外實驗，運用MTT試驗、劃痕試驗Transwell侵襲試驗、明膠酶譜分析、三維培養(yǎng)等技術(shù)，觀察IL-23對小鼠黑色素瘤細胞增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響，得出以下結(jié)論:
　　 1、慢性炎癥與惡性黑色素瘤共存動物模型中，部分白細胞介素類炎癥因子的

10、釋放能夠促進黑色素瘤內(nèi)皮血管的生長:分析細胞因子的含量與腫瘤微血管密度的結(jié)果表明，IL-17、IL-23、VEGF的含量均與MVD呈正相關(guān)，且IL-17、IL-23與VEGF呈正相關(guān)，說明IL-17和IL-23很可能會通過促進VEGF的分泌，繼而促進內(nèi)皮血管的生成。
　　 2、白細胞介素-23對小鼠黑色素瘤B16F10細胞擬態(tài)血管形成的影響:通過MTT試驗、劃痕試驗、Transwell侵襲實驗、三維培養(yǎng)試驗以及明膠酶譜分析，結(jié)果