1、第一章HDL和apoAI抑制脂質(zhì)筏介導(dǎo)的抗原提呈
　　目的:甲基-β-環(huán)糊精(MCD)去除抗原提呈細(xì)胞脂質(zhì)筏內(nèi)膽固醇可抑制抗原提呈和T細(xì)胞激活，然而介導(dǎo)細(xì)胞膽固醇流出的高密度脂蛋白(HDL)和載脂蛋白AI（apoAI）是否具有相似作用尚不清楚。
　　方法：用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激骨髓來源的樹突狀細(xì)胞成熟。然后將抗原負(fù)載的成熟樹突狀細(xì)胞與HDL和apoAI共同孵育，檢測細(xì)胞抗原提呈能力的變化，并測定HDL和apo

2、AI對脂質(zhì)筏內(nèi)膽固醇含量的影響。通過激光共聚焦顯微鏡進(jìn)一步觀察HDL和apoAI對脂質(zhì)筏內(nèi)MHCⅡ類分子蛋白含量的影響。
　　結(jié)果：Ox-LDL可以將骨髓來源的未成熟樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)為成熟的樹突狀細(xì)胞。將抗原負(fù)載的樹突狀細(xì)胞與HDL和apoAI共同孵育后，樹突狀細(xì)胞的抗原提呈和T細(xì)胞激活能力降低。并且該降低程度與HDL和apoAI介導(dǎo)的細(xì)胞膽固醇流出的增加程度相平行。給予HDL和apoAI孵育后的樹突狀細(xì)胞補充膽固醇可以恢復(fù)其抗原提

3、呈和T細(xì)胞激活能力。分離樹突狀細(xì)胞脂質(zhì)筏，結(jié)果表明HDL和apoAI降低細(xì)胞脂質(zhì)筏內(nèi)膽固醇含量。并通過激光共聚焦顯微鏡證實HDL和apoAI減少細(xì)胞脂質(zhì)筏內(nèi)MHCⅡ類分子蛋白含量。
　　結(jié)論：HDL和apoAI通過介導(dǎo)樹突狀細(xì)胞膽固醇流出，破壞細(xì)胞膜脂質(zhì)筏，從而抑制細(xì)胞MHCⅡ類分子抗原提呈。
　　第二章 ABCA1介導(dǎo)apoAI形成新生HDL的模型
　　目的：ApoAI通過細(xì)胞跨膜蛋白ABCA1介導(dǎo)，接受來自細(xì)胞的膽

4、固醇和磷脂，形成新生HDL。但是，這一過程分子水平的機制至今仍然不清楚，本研究旨在闡明ABCA1介導(dǎo)的由apoAI形成新生HDL的機制。
　　方法：將野生型(WT) ABCA1及來源于丹吉爾病的變異型ABCA1(W590S和C1477R)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞。檢測不同轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的apoAI結(jié)合能力，將胞膜內(nèi)面脂質(zhì)轉(zhuǎn)移至胞膜外面的能力，以及膽固醇流出至apoAI和?；悄懰徕c(NaTC)的能力。用監(jiān)測蛋白解折疊和脂化狀態(tài)的熒光分

5、子標(biāo)記apoAI，所得標(biāo)記蛋白分別稱作apoAI解折疊標(biāo)記物和apoAI脂化標(biāo)記物，用以檢測apoAI自身蛋白解折疊和脂化狀態(tài)。
　　結(jié)果：與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染W(wǎng)T和W590S ABCA1的細(xì)胞與apoAI結(jié)合能力增加，而轉(zhuǎn)染W(wǎng)T和C1477R ABCA1的細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比，其將脂質(zhì)從胞膜內(nèi)面轉(zhuǎn)移至胞膜外面的能力增加。說明這兩個基因突變型分別缺失了ABCA1的兩個不同且相互獨立的功能。在膽固醇流出實驗中，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染W(wǎng)590S

6、ABCA1和C1477R ABCA1的兩個細(xì)胞系對apoAI的膽固醇流出能力均降低約50％，說明ABCA1的這兩個不同的功能對于膽固醇流出的能力都是不可或缺的，而且只有同時兼具兩個功能才能使細(xì)胞膽固醇流出達(dá)到最大效率。在非細(xì)胞實驗中，用apoAI和DMPC脂質(zhì)體組建重組高密度脂蛋白(rHDL)，apoAI熒光標(biāo)記物表明隨著rHDL的形成，apoAI蛋白處于解折疊和被脂化狀態(tài)。在細(xì)胞實驗中，WT和這兩個變異型ABCA1的細(xì)胞表面均出現(xiàn)ap

7、oAI蛋白解折疊現(xiàn)象，而未轉(zhuǎn)染ABCA1的細(xì)胞則無apoAI蛋白解折疊。但是，apoAI蛋白脂化現(xiàn)象沒有在表達(dá)ABCA1的細(xì)胞表面觀察到。不過在用apoAI脂化標(biāo)記物與表達(dá)ABCA1的細(xì)胞孵育24小時后，在培基中可測到被脂化的apoAI，為細(xì)胞表面解離下來的新生HDL。
　　結(jié)論：ApoAI結(jié)合能力和胞膜脂質(zhì)轉(zhuǎn)移能力是ABCA1的兩個不同且相互獨立的功能，并且都可以使apoAI在細(xì)胞表面解折疊，然后脂化形成新生HDL。依據(jù)本研究結(jié)