1、樟科(Lauraceae)是一個較大的木本植物類群，樟科植物起源古老、分布廣泛、生態(tài)及經(jīng)濟價值顯著，在被子植物分類系統(tǒng)中占有舉足輕重的地位。但由于目前對該類群植物的系統(tǒng)演化關系認識十分匱乏，再加上長期以來對樟科植物無節(jié)制的開發(fā)利用，導致樟科植物中的很多種處在瀕危境地，被列為我國瀕危保護植物。目前國內(nèi)外有關對樟科這些瀕危植物的瀕危機制及遺傳多樣性的研究很少，嚴重影響了對這些瀕危植物的保護。因此開展樟科植物的系統(tǒng)分類及其遺傳多樣性研究具有重

2、要的理論意義和應用價值。 沉水樟[Cinnamomummicranthum(Hayata)Hayata]是我國樟科樟屬的重要經(jīng)濟樹種，其精油是較好的提煉芳香油的材料；木材是造紙的好材料；其樹形優(yōu)美，也是很好的園林和行道樹種。且沉水樟為我國臺灣和大陸的間斷分布種。由于長期以來對沉水樟的破壞，導致沉水樟天然林資源銳減，處在瀕危境地，目前僅在福建省建甌市萬木林自然保護區(qū)內(nèi)有大面積的分布，已被列為我國的瀕危保護植物。針對目前國內(nèi)外對樟科

3、植物系統(tǒng)分類的研究現(xiàn)狀，本研究采用ISSR分子標記技術對樟科沉水樟天然居群和遷地保護居群的遺傳多樣性進行研究，從分子水平上分析沉水樟種群的生態(tài)遺傳及其遺傳變異規(guī)律；同時利用ISSR分子標記技術比較沉水樟及其近緣種香樟、陰香、閩楠、桂北木姜子、新木姜子、香葉樹、鱷梨在分子水平上的親緣關系，揭示這些樹種在樟科植物系統(tǒng)進化中的作用與地位，探討沉水樟及其近緣種的遺傳多樣性及其分化格局，為樟科植物的系統(tǒng)分類提供分子水平的依據(jù)。主要研究結果如下：

4、 (1)建立了適合樟科植物材料的DNA提取方法。樟科植物材料中含有大量的多糖和酚類物質，且不同植物內(nèi)含物存在一定差異，給樟科植物的DNA提取增加了難度。本研究通過大量試驗摸索研究出了去除上述物質的方法，從而建立了適合沉水樟及其近緣種香樟、閩楠、桂北木姜子、新木姜子、香葉樹、鱷梨的CTAB法；而陰香葉片中所含脂類、多糖類物質多，導致提取物粘稠，在提取過程中先進行預處理后采用SDS法的DNA提取方法。所提的DNA可以滿足ISSR-PC

5、R反應的要求。 (2)經(jīng)過反復對比試驗，建立了適合沉水樟的ISSR-PCR分析反應體系和擴增程序。反應體系：20μL反應體系中加入模板75ng，引物0.4μmol/L，dNTP200μmol/L，Taq酶1.25U，Mg2+1.5mM；擴增程序：94℃，7min→(94℃，30s→53～58℃，45s→72℃，90s)45→72℃，7min→4℃保存。 (3)從UBC＃系列的100條引物中篩選出能夠擴增出穩(wěn)定產(chǎn)物、擴增條

6、帶清晰、特異性強的18條引物用于沉水樟天然居群和遷地保護居群的分析；24條引物用于沉水樟及其近緣種香樟、陰香、閩楠、桂北木姜子、新木姜子、香葉樹、鱷梨的分析。 (4)研究篩選出18個擴增良好的引物，用于沉水樟兩居群的遺傳多樣性的檢測。18個引物擴增了兩個沉水樟居群的44個個體，共擴增出DNA片段95條。不同引物的擴增片段為3～7個，平均每個引物擴增出5.28條帶。沉水樟天然居群擴增了38條具有多態(tài)性條帶，多態(tài)位點百分數(shù)(P)為4

7、0％；沉水樟遷地保護居群擴增了30條具有多態(tài)性條帶，多態(tài)位點百分數(shù)(P)為31.6％。 (5)研究篩選出24個擴增效果好的引物進行沉水樟近緣種親緣關系分析。24個ISSR引物在樟科6屬8個物種之間共擴增出234條條帶，平均每個引物擴增出9.75條，多態(tài)性條帶在樟屬3個物種間有119條，占總擴增帶的50.9％；多態(tài)性條帶在樟科6個屬8個種間有216條，占總擴增帶的92.4％。 (6)ISSR-PCR擴增結果和UPGMA聚類